氨甲酰促红细胞生成素防治糖尿病视网膜病变的作用及机制.docx

主堡塞墅堕型盘查!!!!至!!旦箜!!鲞箜!!塑!堕!!垦!P QE!!!!!翌!!!堕!!!竺!!!!!!!!!!!：!!!堕!：!!·实验研究·氨甲酰促红细胞生成素防治糖尿病视网膜 病变的作用及机制刘晓静 朱弼琚 邹海东 胡道德 仇亚婷 顾青 刘垄 许迅【摘要】 背景近年来糖尿病视网膜病变(DR)的研究聚焦于药物治疗。促红细胞生成素(EPO)能减 少DR神经组织的结构和功能损伤，但具有促进视网膜新生血管形成的潜在危险。氨甲酰EPO(CEPO)具有 相同的神经保护作用，且无促进新生血管形成的作用，但其神经保护作用尚未在眼部疾病，尤其是DR中得到 证实。 目的 比较CEPO与EPO在抗DR的神经成分和血管成分中的作用及机制。 方法用化学合成法制备EPO衍生物CEPO。将60只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、DM组、DM+EPO组 和DM+CEPO组，用链脲佐菌素(STZ)60 nlg／kg腹腔内注射建立大鼠DM模型，而正常对照组大鼠腹腔内注 射等体积枸橼酸一枸橼酸钠缓冲液。每周监测大鼠血糖。造模后4周，DM+EPO组和DM+CEPO组大鼠分别 腹腔内注射50 p．g／kg EPO和CEPO，正常对照组和DM组大鼠均采用等量双蒸水腹腔内注射。干预后2周对 各组大鼠进行视网膜电图(ERG)检查，然后处死大鼠摘除眼球制备视网膜标本，分别进行视网膜组织学检 查，采用TUNEL法检测视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡情况，采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别 检测各组大鼠视网膜中异源二聚体受体(CDl31)、EPO受体(EPO—R)、胸腺细胞分化抗原-1(Thy一1)、胶质纤 维酸性蛋白(GFAP)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及其蛋白质的表达。 结果 合成产物为纯度较高 的CEPO。造模后至药物干预后2周，DM组、DM+EPO组和DM+CEPO组大鼠体质量明显低于正常对照组， 而血糖水平明显高于正常对照组，4个组间差异均有统计学意义(F=49．39、455．91，均P=0．00)；DM组大鼠 ERG OPs振幅较正常对照组大鼠明显下降，差异有统计学意义(P=0．03)，而DM+EPO组与DM+CEPO组OPs波振幅与正常对照组大鼠比较差异均无统计学意义(P=0．55、0．49)；4个组间大鼠ERG a波、b波振幅的 差异均无统计学意义(F=0．30、1．12，P0．05)。与正常对照组大鼠比较，DM组大鼠视网膜组织厚度变薄， RGCs计数减少，视网膜中TUNEL染色阳性细胞增多，而DM+EPO组和DM+CEPO组大鼠视网膜全层厚度、 内丛状层(IPL)、内核层(INL)厚度均明显薄于DM组大鼠，4个组间差异均有统计学意义(F=61．23、23．35、13．33，均P=0．00)，RGCs数目明显多于DM组，4个组间差异有统计学意义(F=15．64，P=0．00)。DM组大 鼠视网膜中Thy一1 mRNA(2““‘)及其蛋白表达量(A值)明显低于正常对照组，DM+EPO组和DM+CEPO组大 鼠视网膜中Thy一1 mRNA及其蛋白表达量明显高于DM组，差异均有统计学意义(P0．05)。DM组大鼠视网 膜中GFAP mRNA(2““1)及其蛋白表达量(A值)明显升高于正常对照组大鼠，DM+EPO组和DM+CEPO组 大鼠视网膜中GFAP mRNA及其蛋白表达量明显低于DM组，差异均有统计学意义(P0．05)。DM+CEPO和 DM+EPO组间大鼠视网膜Thy一1或GFAP表达量差异均无统计学意义(P0．05)。DM+EPO组大鼠视网膜中 EPOR mRNA及其蛋白表达量明显高于其他各组，而DM+CEPO组大鼠视网膜中CDl31 mRNA及其蛋白表达 量明显升高，差异均有统计学意义(P0．05)。在DM组和DM+EPO组大鼠VEGF mRNA及其蛋白表达量均 明显高于正常对照组大鼠，DM+CEPO组大鼠视网膜中VEGF mRNA及其蛋白表达量明显低于DM+EPO组， 差异均有统计学意义(P0．05)。 结论 CEPO在防治DR患者视网膜神经细胞损伤中的作用与EPO相似， 且不存在EPO的促新生血管形成的作用。CEPO可能通过CDl31受体发挥视网膜神经保护作用。【关键词】促红细胞生成素／拟似物，衍生物；氨甲酰促红细胞生成素；神经保护剂；糖尿病／并发症；糖尿病视网膜病变／防控；SD大鼠；视网膜神经节细胞；凋亡；异源二聚体受体／CDl31受体DOI：10 3760／cma．j．issn．2095-0160．2014．1 1．005 基金项目：国家自然科学基金项目 作者单位：200080上海交通大学附属第一人民医院眼科(刘晓静、朱弼瑁、邹海东、仇亚婷、顾青、刘垄、许