埃博拉出血热的实验室检测和生物安全.ppt

埃博拉出血热的实验室检测方案 及生物安全要求 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中国疾病预防控制中心 （海南省CDC 马焱） 2015-08 主要内容 埃博拉出血热病原学 实验室检测方案 （第三版） 3. 生物安全要求 相关标本采集、包装、运输技术指南 埃博拉出血热 病原学 埃博拉出血热是由埃博拉病毒（Ebola virus, EBV）引起的一种发生于人类和非人灵长目动物（猴子、大猩猩和黑猩猩等）的急性出血性传染病。 EBV属于丝状病毒科，病毒有脂质包膜。埃博拉病毒基因组是不分节段的负链RNA，大小为18.9kb，编码7个结构蛋白和1个非结构蛋白。 病毒呈长丝状体，可呈杆状、丝状、 “L”形等多种形态。 毒粒长度平均1000nm，直径约100nm。 埃博拉病毒对热有中度抵抗力 在室温及4℃存放1个月后，感染性无明显变化 60℃灭活病毒需要1小时 100℃5分钟即可灭活 埃博拉病毒对紫外线、γ射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和脂溶剂敏感。 埃博拉出血热病原学 埃博拉病毒分型 目前已发现5种埃博拉病毒，不同亚型病毒基因组核苷酸构成差异较大，但同一亚型的病毒基因组相对稳定。 扎伊尔型（EBOV）：对人致病性最强，曾引起暴发 苏丹型（SUDV）：对人致病性其次，曾引起暴发 本迪布焦型（BDBV）：对人致病性更次，曾引起暴发 塔伊森林型（TAFV）：对黑猩猩致病性强，对人似较弱 赖斯顿型（RESTV）：对人不致病 埃博拉出血热实验室检测方案 （第三版） 包括留观病例、疑似病例和确诊病例 一. 检测对象 　 二. 标本采集、保存和运输 （一）标本采集 用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mL，标记后4℃保存，填写标本采集登记表。 留观病例、疑似病例采集发病3日后静脉血2管，送具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测； 确诊病例采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病所进行检测。 （二）标本保存、运送 二. 标本采集、保存和运输 未分离血清的全血标本应4℃保存，并尽快送具有埃博拉出血热检测资质的实验室分离血清、检测；血清标本长期保存应置于-70℃或以下冰箱，1周内保存可置-20℃冰箱。 标本运输应按照相关生物安全规定，采取A类包装，低温冷藏运输，避免反复冻融 埃博拉病毒核酸检测 埃博拉病毒抗原检测 IgM、IgG抗体检测 三、检测内容 （一）病原学检测 1.核酸检测： 是目前早期诊断、早期发现埃博拉出血热病例的主要检测方法。为提高检测的敏感性和特异性，用实时荧光PCR 方法针对埃博拉病毒2个不同的基因进行检测，在病例筛查时，任一基因检测阳性均可判为埃博拉病毒阳性；在确诊病例出院时，需针对2个基因的检测同时阴性，方可判定为阴性。 四、实验室检测方法 2. 病毒抗原检测： 用酶联免疫法检测埃博拉病毒抗原。病毒抗原检测阳性可确诊。 发病后3天内，血标本中埃博拉病毒抗原检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染。 发病后3～10天血标本病毒抗原检出率高。 四、实验室检测方法 （二）血清学检测 1. 血清特异性IgM抗体：采用捕获法ELISA方法检测。IgM抗体阳性可确诊。 2. 血清特异性IgG抗体：目前采用间接法ELISA检测IgG抗体。 单份血清埃博拉病毒IgG抗体阳性提示曾经感染埃博拉病毒，双份血清埃博拉病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍或者以上增高者可确诊。 四、实验室检测方法 （三）结果的报告、复核和反馈 埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核检测。实验室检测结果应及时反馈标本送检单位，并尽快上报上级主管部门 。 四、实验室检测方法 五、生物安全 按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全工作。 1．凡涉及埃博拉病毒的分离、培养和动物实验，需在生物安全4级（BSL-4/ABSL-4）实验室内进行。 涉及未经培养有感染性材料的实验活动，需在BSL-3实验室内进行。 血清学检测