基因工程的基本操作程序 (上课用).ppt

复习:基因工程的基本操作步骤 提取目的基因， 目的基因与运载体结合， 将目的基因导入受体细胞， 目的基因的表达和检测 看课本P8的图 一、目的基因的获取 1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子 2、获取方法： （1）人工合成 （2）从基因文库中获取目的基因 (3) 利用PCR技术扩增目的基因 从基因文库中获取目的基因 ①、什么叫基因文库？ 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 基因文库的构建模式图 ③利用PCR技术扩增目的基因 PCR:聚合酶链式反应：是以DNA变性、复制的某些特性为原理设计的 前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需要设计引物。 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 总结：表达载体需由哪几部分组成 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 三、目的基因导入受体细胞 1、导入植物细胞常用的方法是什么？具 体过程是怎样的？ 2、导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 3、导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 1、导入到植物细胞常用的方法有农杆菌感染法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）和花粉通道法 2、导入到动物细胞常用的方法是显微注射法（先提纯目的基因，再体外注射入卵细胞或受精卵中，最后将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体。 3、导入到大肠杆菌（原因？）时先用Ca2+处理成感受态后与溶有载体DNA的缓冲液混合,吸收DNA分子,完成转化 四、目的基因的检测与鉴定 导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 四、目的基因的检测与鉴定 * 一.2 基因工程的基本操作程序 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） 基因组文库与部分基因文库的关系 通过对 受体菌 的培养而 储存基因 ②如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。 PCR技术原理 及反应过程 原理： DNA双链复制 反应过程： 1加热至90～95 ℃ 目的基因DNA解链 2冷却至55～60 ℃， 引物结合到互补DNA链 3加热至70～75 ℃， 热稳定DNA聚合酶从 从引物起始互补链的 合成 二、基因表达载体的构建 1、基因表达载体的组成 复制原点 目的基因 启动子 终止子 标记基因等 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？ 调节基 因 操纵基 因 结构基 因 RNA聚合酶 半乳糖苷酶 酶 酶 RNA聚合酶 启动子 结构蛋白基因 RNA聚合酶 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞 中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 它们的作用是？ 哪些细胞可以作为目的基因的受体？ *