实验《检测生物组织中的糖类、蛋白质、脂肪》职教中心王富生.ppt

一、实验原理 可溶性还原糖 ＋ 二、几种重要的试剂 斐林试剂 三、实验方法与步骤 还原性糖鉴定的简易实验： 取一小块梨，用镊子夹住，滴加几滴新配置好的斐林试剂，然后放在酒精灯火焰上方，很快就会看到有有砖红色的颜色生成。 四、注意事项 学而时习之，不亦说乎？ 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 蛋白质 ＋ 脂肪 ＋ 斐林试剂 双缩脲试剂 砖红色沉淀 苏丹Ⅲ染液 苏丹Ⅳ染液 橘黄色 红色 紫色 颜色反应 淀粉 ＋ 碘液 蓝色 甲液（0.1g/mL的NaOH溶液） 乙液（0.05g/mL的CuSO4溶液） 现配现用 混合均匀 双缩脲 试剂 A液（0.1g/mL的NaOH溶液） B液（0.01g/mL的CuSO4溶液） 现配现用 先加A液 再加B液 苏丹Ⅲ（ Ⅳ）染液：用来鉴定脂肪的存在 碘液： 用来鉴定淀粉的存在 1、可溶性还原糖的鉴定 (1)制备组织样液：苹果洗净、去皮、切块→取5g加少许石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液 (2)鉴定样液：取2mL样液于试管中→注入 2mL刚配制的斐林试剂，振荡混合（淡蓝色）→ 水浴加热2min左右，观察溶液颜色变化（先变为棕色，再变为砖红色） 制备生物组织样液 取材、研磨、过滤 取样 取2ml组织样液注入试管注入试管中 注入试剂 向试管中注入1 ml刚配制的斐林试剂 加热和观察 (甲乙液等量混合均匀后再注入) 还原糖的检测和观察： 蓝色 棕色 砖红色 2.脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片 制片： ①选取最薄的薄片移至载玻片中央 ②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ) 染液2 － 3滴，染色 ２－３min ③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色 (多余的苏丹Ⅲ ) ④吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片 显微观察： 先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察 现象： 有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒 脂肪微粒 3、蛋白质的鉴定 (1)制备组织样液：浸泡黄豆1～2d→去皮、切成薄片，加少许石英砂及5mL水研磨→漏斗垫纱布后过滤，得到样液（用蛋清要稀释10倍以上，否则实验后黏住试管壁不易洗净） (2)鉴定样液：取2mL样液于试管Ⅰ中→加入 1mL双缩脲试剂A液摇匀（造成一个碱性环境）→ 加入双缩脲试剂B液4滴，摇匀，注意颜色变化（溶液变为紫色）。另取 清水于试管Ⅱ中→加入 摇匀→ 颜色变化，作为 。 2mL （A液、B液） 无 对照 制备生物组织样液 取材研磨过滤或制备蛋清液 注入组织样液 取一支试管注入黄豆组织液（或蛋清液）2ml 注入试剂A 加入2ml双缩脲试剂A 加入双缩脲试剂B液4滴 观察颜色变化 在蛋白质鉴定实验中，必须先加A液再加B液的原因是: 为什么加入4滴B液而不能过量？ 在碱性溶液中，蛋白质容易与Cu2+ 发生紫色反应，否则就容易生成蓝色Cu (OH) 2沉淀对实验现象有遮蔽作用 加入过量的双缩尿试剂 B液，CuSO4在碱性溶液中生成大量的蓝色Cu (OH) 2沉淀会遮蔽所产生的紫色。 蛋白质的检测结果 4.淀粉的鉴定 取材：马铃薯匀浆 检测： 碘液2滴 现象： 摇匀后变成蓝色 [1]斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸铜溶液 ）分别配制、储存，使用时再临时配制，甲乙液滴等量混合均匀后立即使用。 [2] 双缩脲试剂的使用，应先加A（0.1g/ml的NaOH溶液）1ml，造成碱性的反应环境，再加B液（ 0.01g/ml 的硫酸铜溶液 ）4滴。 [5]在鉴定脂肪的实验中，若用花生作实验材料，必须提前浸泡3—4个小时，浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成型，染色时间不易过长。 [4]在蛋白质的鉴定试验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，以免实验后粘住试管，不易洗刷。 [3]在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的熔液冲出试管，造成烫伤。 问题探讨: 1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？ 作对照 2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能 过量？ 过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。 3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。 深化 比较项目 试剂及成分 原理 溶液浓度 方法