实验一 洋葱根尖Feulgen染色、有丝分裂制片及染色体变异观察.ppt

基础遗传学实验 2012.10-2012.11 授课及辅导教师： 薛 挺 xueting@ustc.edu.cn 3607438 刘晓燕 lxyan@ustc.edu.cn 3600453助 教： 张 旭 zhangxut@mail.ustc.edu.cn 3607438基础遗传学实验 有丝分裂制片及染色体变异观察 临时制片技术 减数分裂制片及观察　　　　　　　　　　　　　　　　　 果蝇幼虫的唾腺染色体制片 果蝇的伴性遗传 果蝇的形态，性状及生活史观察 小白鼠骨髓细胞染色体制片技术 *开放性、自主性实验 实验项目 态度端正 规范操作 爱护仪器设备 节约试剂 注意安全 保持环境卫生 实验要求 实验报告 50％ 实验记录、实验结果真实可靠 *总结与分析 独创性 课外文献查阅 增加知识 课堂考核 40％ 课前提问 预习 现场评分 部分实验的实验中考核 操作是否规范 实验方法，仪器使用等 其它 10％ 纪律，着装，公共服务等 成绩评判标准 洋葱根尖Feulgen染色、有丝分裂制片及染色体变异观察 实验目的 1、掌握植物根尖染色体制片技术 2、掌握Feulgen染色方法 3、熟悉有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 实验原理 有丝分裂（mitosis） 植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，有大量处于分裂高峰期的细胞，此时经预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，在显微镜下可以观察到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 有丝分裂（mitosis） 分裂间期 （染色质没有高度螺旋化形成染色体，而是以染色质的形式进行DNA单链复制） 分裂期 前期 （prophase） 膜仁失，两体现； 中期 （metaphase）体列中，数清晰； 后期 （anaphase） 点裂增，体均分；　　 末期 （telophase） 前期反，中现板（植物） 秋水仙素 秋水仙素，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名,也称秋水仙碱。纯秋水仙素呈黄色针状结晶，熔点157℃。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。 秋水仙素能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。这种由秋水仙素引起的不正常分裂，称为秋水仙素有丝分裂。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。 自1937年美国学者布莱克斯利（A.F.Blakeslee）等用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种。 孚尔根(Feulgen)染色法 细胞内的DNA在1N HCl 60℃水解时部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键而使嘌呤碱脱掉，从而使脱氧核糖的第一个碳原子上潜在的醛基获得了自由状态。 用无色的亚硫酸品红（schiff试剂）去染经酸解的细胞时，可与染色体DNA上游离的醛基结合，生成呈红色的醌式结构，从而使DNA分子着色。这一反应是1924年由Feulgen 和Rossonbek 所发现和确定的，已广泛用作鉴别DNA的一种特异性检查方法。 实验用品 器具： 解剖针 载玻片 盖玻片 离心管 试管架 吸水纸 长滴管 废液缸 试剂： 漂染液 蒸馏水 45%醋酸 每大组（每张桌子）： 1NHCL 带盖瓷缸（内有保鲜膜） 实验方法和步骤 1、材料准备 洋葱根尖：通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20－25℃光照条件下培养2－3天以后，待根长1－2cm或更长时，于上午9：00-11：00剪下根尖备用。 2、预处理 为获得较多中期分裂相的细胞，且使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，方法如下（取其一即可）： （1）0.05％－0.2％的秋水仙碱水溶液处理2－4小时； （2）0.002M的8－羟基喹啉溶液处理3－4小时； (3) 根尖浸在蒸馏水中于在1－4℃低温下处理24小时。 3、固定 用蒸馏水洗净材料，再用卡诺氏固定液室温下固定至少30－