常规组织病理技术2012.ppt

HE染色中的注意事项 脱蜡 染色 脱水 透明与封片 Normal thyroid gland with follicles filled with colloid, medium power microscopic Normal myocardium, medium power microscopic Fatty change, liver, microscopic 常规石蜡切片和HE染色质量标准 切片完整，厚度4-6 um（confocal 切片除外），薄厚均匀，无褶无刀痕。 染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。 主要参考文献 1. 陈杰, 李甘地. 病理学. 北京: 人民卫生出版社, 2005 2. 李甘地. 组织病理技术. 北京: 人民卫生出版社, 2002 3. 王伯沄. 病理学技术. 北京: 人民卫生出版社, 2001 4. /WebPath/webpath.html * 07/16/96 * ## * 07/16/96 * ## * 07/16/96 * ## 单纯固定液 甲醛（formaldehyde） 中性甲醛液 丙酮 酒精 混合固定液 乙醇-甲醛液（A-F液） Bouin液 Zenker液 Carnoy液 4%多聚甲醛-磷酸缓冲液 第二章 组织切片技术 第一节 组织的脱水、透明和浸腊 脱水 透明 浸腊（浸透） 骨和含钙组织脱钙法 脱水 借某些溶媒置换组织内水分的过程。 最常用脱水剂：酒精 透明 通过某种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，称之为透明。 最常用脱水剂：二甲苯 浸蜡 组织经透明后，在溶化的石蜡内浸渍的过程称为浸蜡。 用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃ 第二节 组织的包埋和包埋方法 组织块经过浸蜡，用包埋剂包起的过程称包埋。 经包埋后，可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。 包埋方法 石蜡包埋法 常规石蜡包埋法 快速石蜡包埋法 火棉胶包埋法 石蜡半薄切片包埋法 树脂包埋法 塑料包埋法 常规石蜡包埋法 有无特殊包埋面（如分层组织、皮肤、内镜标本等） 包埋蜡的温度与组织块的温度接近 包埋完毕，蜡块稍凝后，移入冷台加速凝固 第三节 组织切片法 石蜡切片法 冰冻切片法 组织切片机和切片机的维护 石蜡切片法 组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。 组织块可长期保存。 最常用，最普遍的方法。 切片前准备 高质量的蜡块和锋利的切片刀 清洁载玻片 恒温烤片装置 铅笔、毛笔、镊子等 切片制作过程 固定蜡块，调整蜡块与刀至合适位置 切片、展片，冰块的应用 轮转式切片机由下至上切，将脆硬难切的部分放在上面 捞片，注意位置，编号 恒温烤片 切片的注意事项 组织的取材与固定 组织的脱水、透明和浸蜡 切片 切片机和切片刀 特殊要求切片的制作 冰冻切片法 应用广泛 对临床手术病人的术中快速诊断具有重要意义 科研应用 恒冷箱切片 温度的调节 包埋机OCT或羧甲基纤维素 切片 吹干或固定 载玻片的处理方法 载玻片 盖玻片 第三章 苏木素-伊红染色方法 苏木素-伊红染色（HE）简介 HE染色是生物学和医学的细胞和组织学最广泛应用的染色方法，在病理学实验室中称为常规染色方法。可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存。 HE染色的基本原理 细胞核染色的原理 细胞浆染色的原理 HE染色中二甲苯、酒精和水洗作用 分化和蓝化作用 细胞核染色原理 细胞核内染色质主要是DNA，带负电，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，因此细胞核被染成蓝色。 细胞浆染色原理 细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物，等电点4.7-5.0。pH在胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正点荷，就能被带负电荷的染料染色。 细胞浆染色原理 伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解呈带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞浆染色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。 二甲苯的作用 脱蜡，使染料易于进入细胞和组织 透明，以利于光线的透过 酒精的作用 苏木染色前，酒精由高浓度向低浓度逐渐下降，目的是洗脱二甲苯，使水分逐渐进入切片。 伊红染色后，酒精由低浓度向高浓度过渡，目的是脱水，为二甲苯进入细胞创造条件。 水洗的作用 在脱蜡经酒精处理后：使切片中进入水，以利苏木精染液进入细胞核中。 染色之后：洗去未与切片结合的染液。 分化后：除去分化液和脱下的染料，中止分化。 伊红染色后：洗去未结合染液，防止大量伊红进入脱水的酒精中。 分化作用 常用分化液：1%盐酸酒精 脱去在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料，保证核浆染色分明。 酸能破坏苏木精的醌型结构，使色素与组织 解离，分化不