免疫实验-双向琼脂扩散试验.ppt

实验二 双向琼脂扩散试验免疫教研室 实验目的 通过本实验掌握双向琼脂扩散试验的基本原理和方法，了解应用和临床意义。 实验原理 抗原与相应抗体在含有电解质的琼脂内，各自向孔四周琼脂中扩散，在抗原与抗体比例合适处形成可见的白色沉淀线。 实验材料 抗原：待检血清 抗体：羊抗人IgG诊断血清 15g/L盐水琼脂 玻片、吸管、打孔器、湿盒等。 实验方法——实验程序 热融琼脂→浇板→打孔→加样→扩散。 实验方法——浇板 取融化的5g/L盐水琼脂4~5ml，注加于普通清洁玻片 实验方法——打孔 待琼脂凝固后，用直径3mm的打孔器打孔，保持孔间距5mm，呈梅花状图案。 实验方法——加样 用微量滴管向孔中加样。中央孔加抗体，外周孔加各待测抗原，并设立阳性对照孔。 实验方法——扩散 将加样完毕的琼脂板放入湿盒中37℃ 48h～72h，并于24h、48h、72h各记录一次。 实验结果 在抗原抗体孔间形成沉淀线 结果分析 若相邻抗原是同一种抗原a，则出现完全融合的沉淀线。 若相邻抗原有相同的抗原成分a，则抗原ab、ac出现部分融合的沉淀线。 若相邻抗原是两种完全不同的抗原a、b，则出现交叉的沉淀线。 临床意义 用于临床血清学诊断，如已知抗体测抗原。 根据沉淀线位置，、形状、数目等，可初步分析抗原抗体的纯度、浓度、扩散速度等理化性状。 谢谢 * * *