新型高效特异抑制VZV---通过VZV编码的胸苷激酶特异识别的二环嘧啶核苷类似物(BCNAs).ppt

1题目 2背景 2.1嘌呤核苷类似物 2.11不足之处 2.2嘧啶核苷类似物 2.21不足之处 3新型高效特异嘧啶类似物 3.1背景 3.2摘要 3.3材料与方法 3.4主要酶促反应体系 3.5结果 3.6讨论 4出现的问题 5对本实验的帮助 1. Specific Recognition of the Bicyclic Pyrimidine Nucleoside Analogs, a New Class of Highly Potent and Selective Inhibitors of Varicella-Zoster Virus (VZV), by the VZV-Encoded Thymidine Kinase 新型高效特异抑制VZV---通过VZV编码的胸苷激酶特异识别的二环嘧啶核苷类似物（BCNAs） 1.1VZV简介 水痘－带状疱疹病毒（varicella-zoster virus，VZV），在儿童初次感染引起水痘，恢复后病毒潜伏在体内，少数病人在成人后病毒再发而引起带状疱疹，故被称为水痘－带状疱疹病毒。 VZV在形态上与HSV相同。仅有一个血清型。基因组有71个基因，编码67个不同蛋白，包括6种糖蛋白（gpⅠ～gpⅥ），现统一分别命名为gE、gB、gH、gI、gC和gL。在受感染的细胞中，糖蛋白gE、gB和gH极为丰富，在病毒体的胞膜中也存在这些糖蛋白。 培养VZV常用人成纤维细胞以及猴的多种细胞，3天至2周左右出现典型的细胞病变，如细胞核内包涵体以及多核巨细胞的形成。病毒在细胞与细胞间扩散，再感染邻近细胞。 2.1嘌呤核苷类似物代表（ACV） 作用机理：在HSV、VZV和EB病毒感染的细胞中，由病毒特异性TK酶将ACV磷酸化为单磷酸化合物，而后被细胞激酶磷酸化为三磷酸化合物，与HSV-DNA多聚酶结合，掺入HSV-DNA，中止HSV-DNA链延伸，阻断病毒复制。正常细胞不能使ACV转化为单磷酸化合物，故有选择性。 2.11注：这种选择性在HSV、VZV和EB中就缺乏之间的选择性。 特别是对VZV-TK表现出极低的亲和力。因此为找到一种特异识别VZV-TK的核苷类似物便迫在眉急了。 2.2嘧啶类似物代表BVDU De Clercq et al., 1979 主要对HSV-1和VZV有极高的选择性，机制与ACV相似，对HSV-2无作用（主要是由于其无法完成磷酸化的第二步）。 McGuigan et al., 1999,2000a,b anti-VZV药BCNA作为高效特异药物进一步完善了BVDU所不能达到的效果。 3.bicyclic nucleoside analogs（BCNAs） 1.表现出对HSV-1、HSV-2及任何细胞培养DNA或RNA病毒的低亲和力。 2.主要修饰部位在长烷基或p-烷基苯基侧链。 3.到目前为止侧链的修饰主要有末端卤素修饰、末端不饱和修饰和pyrro and thieno substitutions。 旨在阐明侧链修饰的作用及寻找一种最有效的末端修饰化合物。 3.1已有的成功例子:cf1743 bearing a p-pentylphenyl as the side chain, has been identified as the most active anti-VZV compound (EC50 = 0.0003 uM) in cell culture and is at least 3000 times more active against VZV in cell culture than is the clinically used ACV (EC50 = 1 uM) (McGuigan et al., 2000) 3.2摘要 本研究显示出BCNAs特异的被两个连续的VZV TK 磷酸化，不同于BVDU可以同时被VZV-和HSV-TK和dTMP激酶识别。 这些观察可能提供BNCAs对VZV高效识别的合理解释。 3.3材料和方法 成分:BVDU,BVDU-MP,BCNA,cf1928,cf1602。核苷类似物用三氯氧磷处理在0摄氏度5H用于磷酸三乙酯的制备，反应加入0.1M碳酸氢盐终止，之后真空干燥，用硅胶柱以丙烷/水/氨水（9:2：1）进行洗脱。成分用31P核磁共振。1H核磁共振和质谱分析法进行特征分析。 放射化学：[CH3-3H]dThd(specific radioactivity（放射性比度）, 52 Ci/mmol) was 酶：TK-1，HSV-