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159dian 2717hua 1195 注：2~3~qq4~9~5~2~6~3~5 / 2`6248qq0221 1、论文的中文摘要、正文、参考文献、附录、致谢等均采用宋体；英文Times New Roman”字体； 2、除表格内容、表注、图注外，均采用小四号字； 3、中英文摘要、正文和附录的行距：1.5倍； 4、图、表：居中，并且前后均要空一行；图注和表头居中；表内文字用5号字（特殊情况用更小号字）。 5、物种要全称并加学名。如中华蜜蜂(Apis cerana cerana) 6、当外文插在中文中间时外文的前和后都要空1格，如本文中“现的Ascosphaera 属孢囊真菌1 引言 1.1 蜜蜂白垩病的发生现状 　 白垩病（Chalkbrood）又名石灰子病、石灰质病等，是当前养蜂生产上危害严重的一种顽固性真菌传染病[1]。蜜蜂白垩病是蜜蜂球囊菌（Ascosphaera apis）引起的，该病最早是1913Massen在德国发现的[2]，其后该病很快蔓延至许多国家[1, 3-5]。1968年以前主要发现在欧洲各国，但到1970年以后迅速传播至美国、加拿大、日本等地[4, 6]。 1.2 蜜蜂白垩病发生症状 蜜蜂白垩拖出巢地面可看见石灰块状尸体[3]。…… 1.5 蜜蜂白垩病的防治 蜜蜂白垩病的防治各学者提出不同方法，…… 1.5.1 预防措施 从大量观察的情况表明，凡是巢内饲料不足的蜂群、弱群以及交尾群等，在白垩病发生流行季节都容易发生此病。…… 1.6 球囊菌属中种的鉴定研究进展 目前自然界中所发现的Ascosphaera 属孢囊真菌有22种[14-15]，都与 Apoidea 总科的社的腐生物[16]。 2 材料与方法 2.1 材料 2.1.1 菌株 ……3 结果与分析 3.1 菌丝体基因组DNA的提取 对9个采自不同地区的菌……要求。 3.2 高特异性引物的设计 参照文献[23]所列的 Ascosphaera 属中20个种的 ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 区段序列，通过比特异性引物，1a-F2/AscoA112、3-F1/AscoA112和1b-F1/AscoA112分别为 A. aggregata、A. apis 和 A. proliperda 的高特异性引物。（空一行） 图2 （空一行）参照文献[23]所列的Ascosphaera属中20个种的 ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 区段序列，通过比较分析各序列的保守区和变异区，分别设计Ascosphaera 属的高特异性引物和部分种的高特异性引物（图2），共计条引物序列（表2）（空一行）表2 Ascosphaera属及其各种的鉴定标记所用引物 引物 正向反向 引物序列（5’-3’） TW81F GTT TCC GTA GGT GAA CCT GC AB282) R ATA TGC TTA AGTTCA GCG GGT AscoA111 F GCACTCCCACCCTTGTCTA 1a-F2 F GGA AAA GAC CCT CGA CGA G 5-R1 R TTT TCA GGT GCG TCC TTC CA 注：来自Curran et al.来自Curran et al.。（空一行） 参照文献[23]所列的 Ascosphaera 属中20个种的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区段序列，通过比较分析各序列的保守区和变异区，分别设计 Ascosphaera 属的高特异性引物和部分种的高特异性引物（图2），共计条引物序列（表2）3 不同工蜂密度蜂群6:00～8:00时对蜂巢中心温度影响的研究 蜂 群 工蜂密度0.75 工蜂密度 1.0 工蜂密度 1.5 35.29722 35.10094 34.8 A a1) C b 注： 1） 小写字母表示差异达显著水平；大写字母表示差异达极显著水平 （空一行） 3.3 PCR扩增对高特异性引物的检测 3.3.1 Ascosphaera 属高特异性引物的检测 用所设计的 Ascosphaera 属高特异性引物 AscoA111/AscoA112 对9个菌株DNA样品进行 PCR 扩增检测，PCR 产物经15（W/V）的琼脂糖凝胶电泳（图）。（空一行） 图4 13 mm 脾间蜂路箱内空间和外界气温变化折线图 3.3.2 种特异性引物的检测 3.3.2.1 A. apis 种特异性引物的检测（空一行）4 讨论根据 Ascosphaera 属的 ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 序列资料设计的属高特异性引物，在 Ascosphaera 属中获得了理想的结果，说明该标记……Anderson et al. 的研究发现，A. apis