杂交鲟主要消化器官脂肪酶活力的测定.ppt

杂交鲟 主要消化器官 脂肪酶活力 的测定 摘要 ： 脂肪酶是动物消化脂肪的重要酶类，其分泌量和活力与动物对脂肪的消化、吸收、利用有关。研究鱼类的消化酶可了解其消化生理的特性，从而为人工饲料的配制提供理论依据。许多学者先后报道了鳜鱼、青鱼、草鱼、鲤、鲫、鲢消化道各部分及肝脏中脂肪酶活性。作为大型的重要经济鱼类和珍贵鱼种的杂交鲟，其消化系统中既有硬骨鱼类的幽门盲囊，又有软骨鱼类的肠瓣，因此具有很强的消化吸收功能。目前对杂交鲟的养殖试验和人工繁殖及苗种培育技术等已有报道。通过对各种消化器官中脂肪酶活力的初步研究，有助于研究、分析其对脂肪的消化能力与各部分消化功能状况，为合理利用人工配合饲料，降低养殖成本，提高养殖效益提供一定的理论依据。 关键词 ：鲟鱼、脂肪酶、Ph 鲟鱼简介 鲟鱼属于辐鳍亚纲（actinopterygii）硬鳞总目（gsnoidomorpha）鲟形目（acipenseriforms） ，为软骨硬鳞鱼，是地球上现存最古老的脊椎动物类群之一，被誉为“活化石” ，大多数为介于温水性鱼类和冷水性鱼类之间的亚冷水性鱼类。其肉厚骨软，营养丰富，味道鲜美，具有很高的经济价值，有“黑色黄金”之称。尤其用鲟鱼卵加工成的鲟鱼籽酱，更是驰名中外的高档食品，是欧美各国的国宴珍品，素有“绿宝石”之称。鲟鱼皮可制胶，同时也是高档的皮革原料；其软骨具有抗癌作用，可直接食用，实为高级营养保健食品。但是，由于全球范围内对鲟鱼的过度捕捞、水电工程和污染等因素，使鲟鱼的资源量大幅度下降或处于濒危状态，鲟鱼的国际价格不断上涨，养殖前景十分看好。因此，鲟鱼的人工增养殖正风糜全国，但景十分看好鲟鱼的基础性研究却远远滞后于生产，积极开展鲟鱼的基础性研究已势在必行，具有重要的现实意义。本试验研究的杂交鲟，其生长速度等各种性状都是较好的，最有养殖应用前景。 本实验应用的杂交鲟是施氏鲟（Ajcipenser schrenckii）♀×西伯利亚鲟（Acipenser baeri Brandt）♂的子一代杂交种，其生长速度等各种性状都是较好的，最有养殖应用前景。 实验内容 1. 试剂与器材 1.1 实验试剂 聚乙烯醇（P.V.P）橄榄油乳化液 0.025mol 磷酸缓冲液（ph 6.0－8.0） 0.05mol NaOH 标准溶液 1%酚酞指示剂 95%乙醇 1.2 实验器材 锥形瓶250ml 18个； 移液管 10ml 1个；5ml 2个；2ml 1个； 吸耳球 1个； 烧杯500ml 2个； 玻璃棒 1个； 胶头滴管 1个； 78HW-1型恒温搅拌器 1台； 电子称 1台； 滴定台 1套（碱式滴定管）； 水浴锅 1台； 匀浆器 1个； 离心机 1台； 解剖器具 1套 。 2. 材料和方法 2.1 实验材料 实验所用杂交鲟取自试验基地，取40日龄幼鱼9尾，平均体长58.70-62.50厘米/尾，平均体重854.0-1021.0克/尾。鱼体健康，摄食正常，无病无伤 。 2.2 样本处理 取鲜活的试验鱼9尾，饥饿24小时后，置冰盘上迅速解剖取出胃、肠道、肝脏、幽门盲肠等脏器并称重（见 表3 所示）。并测的其ph值（见 表4 所示） 2.3 酶液制备 取新鲜的胃、肠道、肝脏、幽门盲肠的各1克，以10倍的蒸馏水匀浆，将组织悬液低温下离心（3000转，10min），上清液为酶粗提取液（即 酶液）。 2.4 酶活力测定 分别取250ml锥形瓶3个，一个作为对照组，另两个为测定组，按顺序（见 表5 所示）加入试剂。 用0.05mol 标准NaOH滴定至微红色，记录下滴定用去的ml数。 3. 实验结果 3.1 实验数据（见 表7 所示） 3.2 计算：酶活力以国际单位表示，即在一定条件下，用脂肪水解每分钟产生1微克分子脂肪酸的酶量定为一个国际单位。 脂肪酶活力单位=（A-B）*N*f / t 式中： A 为样品耗去碱液ml数； B 为对照组耗去碱液ml数； N 为每毫克碱液微克分子数； f 为稀释倍数； t 为作用时间（min）。 4. 实验讨论 4.1 本实验用滴定法测定脂肪酶活性，此法灵敏度较差，样品用量大，但所需设备较简单，可随时进行检测。 4.2 pH 值是影响酶活性的最重要的理化因子，其对酶活性的影响主要是通过影响酶分子上活性基团的解离状态得以实现。当处于最适 pH 值时，酶分子的活性基团的解离状态最适于与底物相结合，从而