欧洲药典HPLC规定.ppt

欧洲药典对HPLC的规定 对仪器的一般要求和色谱条件 对仪器的一般要求和色谱条件 2.流动相 （1）流动相组成比例：±30%，最小组成的比例可以调整30%，但是，任何组成的比例的改变不能超过±10%. 例如：60:40乙腈/水，水的比例可以调整±12%（=40*30%），但是这超过了±10%的限制。因此，这个条件下，水的比例只能在30%至50%之间进行调整。 （2）流动相pH值：±0.2，pH7.6可以在7.4-7.8之间调整 对仪器的一般要求和色谱条件 3.缓冲盐浓度：±10%，例如：20mM磷酸钾可以在18-22mM范围内，只要pH值符合要求就行 4.流速：±50%，例如：1mL/min流速可以在0.5至1.5mL/min范围内变化 对仪器的一般要求和色谱条件 5.进样体积：只要精密度和检测限可以达到要求就可以减少 6.柱温：10%，最大不超过60℃ 7.紫外可见检测器检测波长：不允许调整 系统适用性试验 （一）关于系统适用性的具体规定 进行有关物质或含量测定时，除另有规定外，色谱图中定量用的对照品溶液，其色谱峰对称因子（即《中国药典》中拖尾因子）应为0.8-1.5。 进行有关物质检查时，定量限（以信噪比为10计算）应小于或等于忽略限。 系统适用性试验 进行原料药的含量测定时，采用对照品溶液进样数次，按下式计算最大允许相对标准偏差（Ｓｒ（％）ｍａｘ）： 式中，Ｋ为常数0.349，从表达式 推导得出 表示Ｂ=1.0时，６次进样后获得的百分相对标准偏差。Ｂ为药典正文中各个品种含量限度的上限与100%之差。ｎ为对照品溶液的重复进样次数（３=ｎ=６）。Ｔ90%,ｎ－１为当自由度为ｎ－１,概率水平为90%,（双侧）时的ｔ检验值。除另有规定外，最大允许相对标准偏差不得超过下表相应的数值。 重复性要求 系统适用性试验 （二）关于系统适用性不符合要求时的具体规定 下表是关于等度洗脱和梯度洗脱液相方法的规定的异同 当柱尺寸改变时，必要时可以按下式改变流速： 式中： F1为药典正文中的流速；F2为改变后的流速；L1为药典正文中的柱长;L2为改变后的柱长；d1为药典正文中柱的内径；d2为改变后柱的内径。  总结:欧洲药典的要求相对较为细致，因而在执行过程中可能比较容易忽视某些细节而出现差错。 * * 1.色谱柱 (1)色谱柱长度：±70%，150*4.6mm规格的色谱柱，柱长可以改变±105mm (2)色谱柱内径：±25%，150*4.6mm规格的色谱柱，内径可以改变±1.15mm (3)粒径大小：可以降至50%，10um的粒径可以调整为5um 　 一起系统过大的滞留体积会明显改变分离度，保留时间和相对保留时间 梯度洗脱 　 10%，最大不超过60℃ 柱温 可以适当调整 只要精密度和检测限可以达到要求就可以减少 进样体积 可以适当调整 ±50%，1mL/min流速可以在0.5至1.5mL/min范围内变化 流速 可以适当调整；一般3~10um，粒径更小（约2um）可用。孔径：分子量小于2000，孔径在150A以下；分子量大于2000，孔径300A。 可以降至50%，10um的粒径可以调整为5um 粒径 可适当调整 ±25%，150*4.6mm规格的色谱柱，内径可以改变±1.15mm 色谱柱内径 可适当调整 ±70%，150*4.6mm规格的色谱柱，柱长可以改变±105mm 色谱柱长度 不可改变 不允许调整 紫外可见检测器检测波长 ±30%，最小组成的比例可以调整30%，但是，任何组成的比例的改变不能超过±10%.60:40乙腈/水，水的比例可以调整±12%（=40*30%），但是这超过了±10%的限制。因此，这个条件下，水的比例只能在30%至50%之间进行调整。 ±30%，最小组成的比例可以调整30%，但是，任何组成的比例的改变不能超过±10%.60:40乙腈/水，水的比例可以调整±12%（=40*30%），但是这超过了±10%的限制。因此，这个条件下，水的比例只能在30%至50%之间进行调整。 流动相组成比例 未明确 ±10%，20mM磷酸钾可以在18-22mM范围内，只要pH值符合要求就行 缓冲盐浓度 未明确 ±0.2，pH7.6可以在7.4-7.8之间调整 流动相PH值 中国药典CHP2010 欧洲药典EP 　 欧洲药典与中国药典的比较 当仪器配置改变时，会影响分辨率和保留时间，可能需要增加延迟体积，因此可以改变梯度开始时等度运行的时间。 　 延迟体积