沙门氏菌检测 生物检测(自己写的)-Riche.ppt

沙门氏菌的检测 沙门氏菌的生物学特性 检测方法 器械和试剂 缓冲蛋白胨水（BPW） 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 亚硫酸铋（BS）琼脂 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 沙门氏菌属显色培养基 三糖铁（TSI）琼脂 HE琼脂 蛋白胨水、靛基质试剂 尿素琼脂（pH 7.2） 氰化钾 （KCN） 培养基 赖氨酸脱羧酶试验培养基 糖发酵管 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基 半固体琼脂 丙二酸钠培养基 沙门氏菌O 和H 诊断血清 生化鉴定试剂盒 A1：典型反应判定为沙门氏菌属。 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 A3：补做ONPG。ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 谢谢！生物技术102班刘建兴 * * 形态染色特性： 沙门氏菌革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌 周身鞭毛，能运动，大多数具有菌毛，能吸附于宿主细胞表面 培养特性： 1、需氧及兼性厌氧菌。 2、在普通琼脂培养基上生长良好，培养24h后，形成中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐的菌落。 3、鉴别培养基（麦康凯、SS、伊红美蓝）：一般无色菌落。 4、三糖铁琼脂斜面：斜面为红色，底部变黑并产气。 生化特性： 1、发酵葡萄糖，麦芽糖，甘露醇和山梨醇产气 2、不发酵乳糖、蔗糖和侧金盏花醇 3、不产吲哚、V-P反应阴性 4、不水解尿素和对苯丙氨酸不脱氨。 1、前增菌：食品样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。加工食品均应经过前增菌。 2、（选择性）增菌：此培养基允许沙门氏菌持续增菌，同时阻止大多数其他细菌的增殖。未经加工的食品不必经过前增菌而直接增菌。 3、选择性平板分离：采用固体选择培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 4、生物化学筛选：排除大多数非沙门氏菌，也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5、血清学技术鉴定培养物菌种。 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 前增菌法 25g＋BPW225mL 36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h 10mL＋MM （或TTB）100mL 10mL＋SC100mL 直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL 检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL 检样匀液25mL ＋SC100mL BS DHL（或HE、WS、SS） TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸 H2S＋ 靛－ 尿－KCN－ 赖＋（或一项不符） 沙门氏菌血清学试验 甘露醇+ 山梨醇+ H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋ H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－ 非如左述的各种反应结果 沙门氏菌血清学试验 ONPG － 沙门氏菌 非沙门氏菌 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h * 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003 1、前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1 mol/mL无菌NaOH或HCl调pH 至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。 2 、增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 。 具体方法 3 、分离 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h （XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或40 h～48 h （BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征。 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 BS琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈