现代临床胰岛移植.ppt

现代临床胰岛移植 胰腺移植 胰岛移植（1970－1990年代） 胰岛移植 1型糖尿病 微创的移植方式 最接近自然生理的调节，保持血糖稳定，避免反复发作的低血糖 遏制血管神经并发症 保护肾脏 更低的抗原性 治愈性方法，脱离胰岛素依赖，恢复生活质量 世界首例人同种异体胰岛移植： 1974年美国明尼苏达大学 以失败告终 失败原因： *胰岛分离技术的限制 *免疫抑制治疗的限制 两次突破性进展 ……1986………1999…… 1986年Ricordi胰岛分离法 供体胰腺 Collagen消化+轻柔机械振荡 平衡液持续冲洗收集+密度梯度离心纯化 高质量的胰岛 1999, Edmonton protocolUniversity of Alberta, Edmonton, Canada Edmonton protocol的成功率 Edmonton中心总成功率一年80％，三年50％，最长非胰岛素依赖已超过5年。 供受体比例2：1 或1：1 在欧美其他中心得到重复验证 至2004年全世界按该方案进行的单纯胰岛移植已超过500例 Edmonton中心12例报道 随访时间：最长20m，平均10.2m 胰岛移植量平均 857,318±43,314IE/人 11例在接受至少9,000IE/kg胰岛后达到非胰岛素依赖 Edmonton中心17例随访报道 17例病人在接受至少9,000IE/kg胰岛后均达到非胰岛素依赖 胰岛移植总量平均12,330±581IE/kg 12例（80％）1年后仍保持非胰岛素依赖 多中心扩展研究 ITN和JDRF共同支持 欧、美、加、澳现共有24个移植中心参与 Edmonton protocol流程 胰岛分离 经皮肝穿门脉置管 病人准备 植入肝脏 术后监测、评估、免疫 抑制治疗、并发症处理 受体选择 1型糖尿病病史长，至少诊断5年以上 年龄30－50岁 体重＜70kg 肝、肾功能尚好，无其他禁忌症 C－肽阴性，血糖控制不佳 反复发作的低血糖症状 关于供体 脑死亡的器官捐献者 30岁以上的供体胰腺更利于胰岛分离，但50岁以上的供体胰岛活力下降 其他供体相关因素：BMI、生前最低血糖水平、最高淀粉酶水平、血管加压药物的使用等 供体胰腺获取 原位灌注冷UW液后切取胰腺，置冷UW液中保存 CIT8h 尽量保护器官的完整，避免污染 改进方法：UW液/氧化全氟化合物双层保护法；胰管灌注glutamine 移植配型 ABO血型 淋巴细胞毒抗体交叉试验 受体PRA（panel reactive antibody) 供体AHG（aggregated human globulin）交叉配型 不需HLA配型 胰岛分离与评估 胰腺获取 消化酶 消化 收集 纯化 灌注 培养 制成输注悬液 GMPGood manufacture practice 消化酶灌注 消化酶配方：HBSS，Liberase… 灌注量相当于胰腺质量的两倍，体积200－350mL 灌注压力控制 消化时间约30－60min 活力评估 荧光染色（FDA PI） 细胞免疫组化insulin染色 静态胰岛素分泌，SI 动态胰岛素分泌，即三阶梯葡萄糖刺激试验，SI，AUC 动态胰岛素分泌 纯化胰岛样品CMRL1066培养过夜，三阶梯葡萄糖刺激实验，检测胰岛素分泌，评估参数包括SI和AUC。 成功分离与不成功分离有不同的胰岛素分泌图形。 分离成功的标准 每个胰腺在纯化程序后回收胰岛 300，000IE；纯度50％；活力评估＞70％；SI＞3 现在成功分离可达40万－60万IE/胰腺 最高记录超过90万IE/胰腺，纯度95% 移植前培养 CMRL1066＋同型人白蛋白＋…… 悬浮培养（95％空气，5％CO2） 37℃过夜，22℃24－48小时 输注前评估 荧光染色活力＞70％ 胰岛计数＞300，000IE 细胞容积＜10mL Gram染色未见细菌污染，内毒素检测阴