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方法学检测原理 光谱分析技术 生化检验反应原理 分析监测方法 二、临床生化检验反应原理 酶偶联法 ---脱氢酶法 ALT AST LDH-L MB HBDH CK BUN 340nm ---氧化酶法 GLU TC TG UA Cr 550nm 色原底物法 α-AMY ALP GGT 405nm 化学法 TBIL DBIL Ca Mg TP ALB Cr 630nm 免疫比浊法 IgG A M C3 C4 CRP ASO RF APOA APOB 340nm NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰，而NAD+和NADP+在340nm无吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有： ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、 α-HBDH 、Glu（己糖激酶法）、 UREA、NH4+ 、CO2等。 NAD+－NADH(NADP+－NADPH )指示系统 ： ALT为例： R1： NADH 、乳酸脱氢酶（LDH） R2： L-丙氨酸 、α-酮戊二酸 ALT L-丙氨酸 +α-酮戊二酸 → 丙酮酸 + L-谷氨酸 LDH 丙酮酸 + NADH + H+ → L-乳酸 + NAD+ + H2O NAD+－NADH(NADP+－NADPH )指示系统 ： p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、r-GT、AMY等。 p-NP和p-NA指示系统 ： ALP为例： R1：AMP缓冲液 、MgCl2 R2：对硝基苯磷酸盐 ALP 对硝基苯磷酸盐+H2O → 磷酸盐+对硝基苯酚 p-NP和p-NA指示系统 ： H2O2偶联的指示系统 ： H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu（氧化酶法 ）、Cr、UA等。 H2O2偶联的指示系统 ： GLU为例： R1：4-氨基安替吡啉 、抗坏血酸氧化酶 R2：葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、酚 。 GOD 葡萄糖 + O2 + H2O → 葡萄糖酸 + H2O2 POD 2H2O2 + 4-氨基安替吡啉+酚 → 醌亚胺 + 4H2O 其他显色反应 ： TP为例： 蛋白质中的肽键在碱性溶液中与铜离子作用产生紫红色络合物，导致540nm吸光度的增加，增加程度与蛋白质的含量成正比。 碱性条件 肽键 + Cu2+ → 紫红色络合物 抗原抗体反应指示系统 ： 特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。 目前利用此指示系统进行测定的临床项目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。 抗原抗体反应指示系统 ： 载脂蛋白为例： R1：磷酸盐缓冲液pH7.5,表面活性剂，防腐剂， 稳定剂； R2：羊抗人apo Al（apo B）抗血清，防腐剂， 稳定剂 。 抗原(血清中apo Al,apo B)+抗体(R2)??缓冲环境?抗原抗体免疫复合物。 光谱分析技术 吸收 散射 可见 400-750nm 紫外