2014猪圆环病毒Cap基因重组质粒的构建及对小鼠免疫效果研究.PDFVIP

动物医学进展。2014，35(2)：37—41 ProgressinVeterinaryM edicine 猪圆环病毒 Cap基因重组质粒的构建及对小鼠免疫效果研究 刘 自立 。，张 志孙，吴发兴 ，刘 爽 ，董雅琴 ，邵卫星 ，段 纲 ，李晓成 一 (1．云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明650201；2．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032) 摘 要：用PCR方法扩增 出猪圆环病毒2型的Cap基 因，将 1个Cap基 因、2个 串联Cap基 因和 3个 串 联 Cap基 因定向克隆于真核表达载体 pcDNA4-His／Max，构建真核表达载体 pcDNA4一His／Max-Cap、pcD— NA4一His／Max一2Cap和pcDNA4一His／Max-3Cap。将构建好的重组质粒 以 100 g／只腿部肌 肉注射 昆明小 鼠，同时设置 pcDNA4一His／Max和生理盐水对照，于首免后 14d、28d再次免疫，并分别于首免后 7、14、28、 35、49d用 ELISA方法检测小鼠抗体水平，对不同串联重组质粒免疫原性进行初步评价 。结果显示，重组质 粒于35d能诱导小鼠产生较 高的体液免疫 ，2个Cap和 3个Cap串联基 因的免疫效果远远高于 1个Cap基 因的免疫效果 ，差异极显著(P0．01)。 关键词：猪 圆环病毒；Cap基 因；核酸疫苗 中图分类号：$852．659．2；Q789 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2014)02—0037—05 猪圆环病毒 (Porcinecircovirus，PCV)为圆环病 PCV一2疫苗奠定基础 。 毒科 ( r∞ ne)圆环病毒属成员，是无囊膜单股 1 材料与方法 环状 DNA病毒，为已知的最小动物病毒之一 ，其基 1．1 材料 因组全长 1767bp或 1768bp_l1]。PCV分为2种类 1．1．1 菌种和质粒 含有猪圆环病毒 2型全基 因 型，其 中PCV-2具有致病性，能引起断奶仔猪多系 的pGEM—PCV一2重组质粒 由中国动物卫生与流行 统衰竭综合征 (Postweaningmultisystemicwasting 病学中心构建并保存 ；pcDNA4一His／Max购 自In— syndrome，PMWS)、猪皮炎 肾病综合征 (Porcine vitrogen公司，宿主菌 E．coliDH5Q购 自宝生物工 dermatitisandnephropathysyndrome，PDNS)及其 程 (大连)有限公司。 他猪圆环病毒相关疾病 (Porcinecircovirusassociat— 1．1．2 酶和试 剂 solution 工，DL 2000，Hind eddiseases，PCVAD)_l2]。目前该病在我 国广泛流 Ⅲ，BamH I，Pst工限制性 内切酶 ，mimiBestplas— 行，给养猪产业造成了严重的经济损失[3]。PCV一2 midpurificationKitver2．0为宝生物工程 (大连)有 含有 l1个 ORF，分别为 ORF1一ORF11。研究表明， 限公司产 品；pfuDNA Polymerase为 Thermo公 ORF2编码的核衣壳蛋 白(Cap)具有较高的免疫原 司；DNA凝胶 回收试剂盒为 QIAGEN产品；In—Fu— 性，能诱导中和抗体的产生，是构建重组疫苗的首选 基 因[4]。KamstrupS等