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Advanced Unicorn Software——Method Edit 新建柱子 具体软件操作如下： ①在Unicorn软件中选择→ Column List ②新建一根自己的柱子：New ③→New Column中输入柱参数：输入Height，柱子直径diameter；输入其他相关参数：Vt，Vo，Max Pressure，Default Flowrate，Max Flowrate等，然后Save As特定的柱名。 这样在Column List中 就有了我们自己编辑好的层析柱。 新建方法： 在Unicorn软件中选择File→New→Wizard→OK Main Selection层析方式选择：Size exclusion →Column：Any→Flexible Flow Rate在不同阶段用不同流速→Next Wavelength 波长选择UV：280 →Pump Inlet入口选择→Next Equalibration： Start Concentration %B→Equalibration Volunme： CV→Watch Equlibration和前一个条件是满足任一条件，就下一步 Sample Injection：Injection Technique: Manual → Empty Loop With：1mL 或者 System Pump Direct Loading系统泵直接上样→Injection Volume 上样体积（必须10mL），默认样品入口为A2(如果HIC，默认B2) →Next Wash Out Unbound Sample清洗未结合蛋白，默认2CV（最后参数表可以修改）→Flowthrough Fractionation穿透峰收集（Frac-900、OFF、Outlet F3出口阀F3收集）→Next Elution Fractionation洗脱收集→Frac-900收集器收集、OFF、Outlet出口阀收集→Fixed Volume Fractionation固定体积收集、Peak Fractionation峰收集、Fixed Volume and Peak Fractionation固定体积和峰收集相结合→Fraction Volume固定体积收集每管体积→Next Peak Fractionation设定峰收集→Peak Identification →UV Level峰高度、UV Slope紫外斜率→Minimum Peak Width最小峰宽（排除气泡峰）→Peak Fractionation Volume→Next Elution洗脱模式(根据工艺选择一种设定) ①Isocratic等度洗脱（凝胶过滤）→Length of Elution 洗脱体积→Finish ②Isocratic with Delayed Frationation延迟峰收集的等度洗脱→Length of Elution before Fractionation 从0.2CV开始采进行峰收集→Length of Elution with Fractionation →Finish ③Linear Gradient 线性洗脱→Target Concentration目标变化浓度→Gradient Length梯度长度（一般10~20CV）→Use cond or concB to start and stop Fractionation利用电导或B%开始或者停止收集→Clean after Elution at 100B%(5CV)清洗→Reequilibration after Elution(5CV)再平衡→Finish ④Segmented Gradient Advanced高级梯度→ Gradient Segments最多可以设定9个步骤 Elution –Segment1(1)(2) →Step阶段梯度\Gradient线性→Pump Inlet A入口→Concentration B浓度→Length of Step 梯度长度 Fraction Volume 固定体积收集→Peak FractionVolume 峰收集设定→设定剩下的梯度后→Finish Variables →Show details检查各个参数，可以修改→Save 运行方法 System Control→Run→方法→OK→Variables检查一下参数→Evalution Procedures→Method Information/Method Duration总体体积和运行时间→Next→Questions→Directory结果保存文件夹/Name结果名→Start Training Material 培训