HBsAg确认试验.ppt

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的确认 储迅涛 博士 免疫测定结果可能出现假阳性 在感染性疾病血清学检验常用的定性ELISA试验中，测定样本的A值≥Cut-off （反应性），但样本中可能并不存在病原体的特异性抗体或抗原 通过确认试验证实样本中存在病原体的特异性抗体或抗原，才可报告结果为阳性 为什么要做确认试验 阳性判断值（Cut-off）的设定 内源性干扰 外源性干扰 试剂质量和实验操作的不精密度 导致假阳性的因素 灰区（GREY ZONE） 在免疫测定中，按Cut-off确定结果为阳性或阴性时，有一个可能出现假阳性或假阴性的范围。这个范围与试剂的质量有关，应由试剂生产单位在确定Cut-off值时确定，需要时在说明书中注出。 灰区的确定 阴性Cut-off和阳性Cut-off之间的区域 阴性标本5000份 均值0.06 标准差0.019 Cut-off 0.11 (99.5%可信限) 阳性标本2000份 均值1.50 标准差0.628 Cut-off 0.08 (99.5%可信限) ELISA测定的“灰区确定” 补体 高浓度的非特异性免疫球蛋白 嗜异性抗体 某些自身抗体 内源性因素 标本溶血：血红素基团有类似过氧化物的活性 标本污染：细菌的内源性酶会产生非特异性干扰 标本贮存时间过长：标本在2~8℃下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深，甚至造成假阳性 标本凝固不全：血液通常30分钟开始凝固，18~ 24小时完全凝固，日常检验时血液还没有完全凝固就分离血清，此时分离出的血清中残留部分纤维蛋白原，检测结果易造成假阳性 试剂盒原材料的纯度、组合、来源等也会造成结果的假阳性或假阴性 外源性因素 测定方法的不精密度 实验操作、样本采集、样本前处理、试剂质量等诸多因素 其它因素 酶免疫测定（ELISA） 放射免疫测定 荧光免疫测定 化学发光免疫测定 金标记快速免疫测定 常用的HBsAg筛查方法 敏感性：据文献报道，到目前为止在献血员中所发现的HBsAg 携带者最低含量为0.2 ng/ml。 国产ELISA试剂的敏感性水平多为0.5ng/ml左右，对极低含量的HBsAg携带者可能出现漏检或“灰区现象” 钩状效应：血液中HBsAg含量最高可达2000000ng/ml，而HBsAg各种检测方法的线性检测范围上限均不超过50ng/ml，测定中有可能出现钩状效应（前带现象） 定量测定：HBsAg在乙肝患者血循环中以三种形式存在，即圆形颗粒、管形颗粒和Dane颗粒。其中只有Dane颗粒中存在乙肝病毒，但其仅占所有HBsAg的0.2%，其它绝大部分为空的圆形颗粒和管形颗粒，所以HBsAg和乙肝病毒之间缺乏正相关。 特异性：目前的各种检测方法均有出现假阳性结果的可能性，这种情况在弱反应性的标本中更为常见。因此，有必要对HBsAg测定呈现有反应性（特别是弱反应性）的标本进一步进行确认试验 HBsAg测定中的问题 HBsAg测定结果的解释（国外试剂盒） Abbott Murex (ELISA) 样本A值 ＜Cut-off (阳性判断值) 非反应性 (non-reactive) 阴性结果 (negative result) 样本A值 ≥ Cut-off (阳性判断值) (初检)反应性 (reactive) 双份复检 双份复检结果: 1. 反应性 反应性 2. 非反应性 反应性 3. 非反应性 非反应性 重复非反应性(阴性结果) 重复反应性 确认试验 HBsAg测定结果的解释（国外试剂盒） Beckmann Coulter Access (化学发光免疫测定) 结果报告 S/CO = Cut-off比率 S/CO ≤1.0 非反应性 (阴性结果) S/CO ＞1.0 反应性