HBV血清标志物.ppt

HBV感染标志物检测过去、现在及展望 最主要的血清学检测指标： HBSAg 阳性　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　通常意味着ＨBV现症感染的存在 　　　 窗口期 HBV感染后可出现HBsAg和抗HBs同时阴性，即所谓窗口期，此时HBsAg已消失，抗HBs仍未产生，少部分病例始终不产生抗HBs。 HBeAg是病毒复制和传染性的标志 血清HBeAg阳性者中，HBV DNA阳性率 为92%左右 （５）抗-HBc （５）前S1抗原（Pre-S1Ag） 检测方法： ELISA竞争抑制法存在的操作问题 MEIA(微粒子酶免疫法）和化学发光法 HBV DNA检测方法 ⒈ 斑点杂交（基本淘汰） ⒉ 定性PCR（基本淘汰） ⒊ 定量PCR（主流） 实时荧光定量PCR ⒋ 基因芯片（将来） 　★不同基因型病毒感染的病程和后果不同：C型对肝的损伤比B型严重，基因型C比基因型B更容易发展成为肝硬化 HBV基因分型常用的方法有： 基因型特异性引物PCR法 限制性片段长度多态性分析(RFLP) 线性探针反向杂交法(INNO-LiPA) PCR微量板核酸杂交酶联免疫法 基因序列测定法等 目前国内经SFDA正式批准的HBV基因分型试剂盒 S区变异 HBsAg亚型转变及血清HBsAg阴性乙肝 P基因变异（核苷类似物耐药变异） 拉米夫定 可产生急性耐药性 （48周——7.3%） YMDD变异：Y（酪氨酸） M（蛋氨酸） I (异亮） D（天冬氨酸） V(缬) D（天冬氨酸） 阿德福韦 耐药突变位点：rtN236T、rtA181V 恩替卡韦 如果乙肝病毒多聚酶存在rtL180M和/或rt M204V/I，rtT184，rtS202和/或rtM250等位点变异将造成对恩替卡韦耐药 HBV 基因变异检测常用的方法 (1) HBV聚合酶区基因序列分析法 (2) 限制性片段长度多态性分析法(RFLP) (3) 荧光实时PCR 法 (4) 线性探针反向杂交法 基因检测在乙肝诊疗各阶段的应用 HBV感染标志物检测的展望 ⑴不断提高检测灵敏度和筛查能力 ⑵开展病原学、流行病学和临床应用研究，进一步发掘乙肝标志物的价值和意义 ⑶新型乙肝标志物的研发应用 不断提高检测灵敏度和筛查能力 灵敏度不足漏检 进一步发掘乙肝标志物的价值和意义 ㈠注意一些少见或罕见的异常模式 HBsAg和anti-HBs共存模式 HBsAg 、anti-HBs 、HBeAg 、 anti-HBe anti-HBc全部阳性模式 单独anti-HBc阳性模式 新型乙肝标志物的研发应用 HBV感染的特异性细胞标志物 HBV特异性T淋巴细胞 CD4CD8 必威体育精装版进展：Ｉnnogenetics公司的线性探针技术，可以辨别同时存在多个耐药突变，检测到＜５％变异亚种 药物治疗方案的确定 （用药：干扰素、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦） 药物治疗 （疗效评价） 前C区1896位点突变检测试剂盒 跟踪随访 乙 肝 病 毒 定 量检测 试 剂 盒 确 诊 病毒学分析 乙肝病毒分型检测试剂盒 拉米夫定耐药检测试剂盒 阿德福韦耐药检测试剂盒 共价闭合环状DNA (cccDNA)检测试剂盒 低浓度感染者和感染早期带毒者 ☆新技术的应用（新的表位、多表位单抗联合应用、新的标记技术研发 ☆检验技术标准化 ①国际上通用两步法（我国实验室追求快速方便，基本都用一步法，牺牲了灵敏度） ②anti-HBc检测国际上均用原倍血清（我国实验室都血清稀释后测定，不同实验室不同厂家试剂稀释比例均不一样，导致anti-HBc检测结果不能比较） anti-HBc在人群中阳性率是一种HBV感染的客观事实，不能通过人为稀释降低阳性率，否则误导流行病调查和临床诊治 （错误做法） 需要对HBV感染自然史、病原学特点致病机制和临床意义等进行研究探讨 ㈡提高血清学监测的准确性和灵敏度，同时开展耐药变异检测，以指导临床合理用药，尽量降低耐药率 反映了HBV感染后机体免疫状态 采用HLA-肽四聚体或五聚体流氏细胞技术捕获HBV特异性T淋巴细胞 检测方法 * * 《中华检验医学杂志 》2010年2月第33卷 第2期 历史回顾 1965年由Blumberg等发现血清中的HBsAg（澳抗、肝炎相关抗原） 1970年Ｄane（戴恩）等在电镜下鉴定的Ｄane颗粒，阐明了病毒的表面成分HBsAg、核壳成分HBcAg