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2017-12-14 发布于河北
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脂肪储存小滴蛋白5重组腺病毒的制备

1083 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.6 MAR.2011 · · 5 * 脂肪储存小滴蛋白重组腺病毒的制备 1 2 1 2 3 1 2△ 薛玲李航张静王净吴雅岚姬秋和叶菁 1 710032 2 710032 （第四军医大学西京医院内分泌代谢科陕西西安；第四军医大学病理与病理生理学教研室陕西西安； 3 第四军医大学唐都医院耳鼻喉科陕西西安710038）摘要目的：利用AdEasy 腺病毒表达系统构建含有小鼠脂肪储存小滴蛋白5(LSDP5)基因的重组腺病毒。方法：从小鼠肝脏cDNA 克隆出LSDP5 基因全长，克隆至pMD18-T 载体中，酶切测序。回收酶切产物，连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV ，构建 pShuttle-CMV-LSDP5 重组质粒，经PmeI 酶切线性化后转化至含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1 的BJ5183 中。筛选阳性克隆，提取 PacI AD293 DNA LSDP5 重组质粒，酶切线性化并转染细胞进行包装，提取病毒，鉴定重组病毒并检测病毒滴度。结果：基因克隆经测序证实与Genebank 公布一致，双酶切重组pMD18-T 载体得到1400 bp 左右的片段。重组穿梭载体经Kpn I 和Sal I 双酶切后 PacI 30 Kb 4.5 Kb AD293 PCR 得到预期片段。酶切得到大片段和小片段。转染细胞后收集病毒，经鉴定，获得理想的目的片段。 9 取病毒上清反复感染AD293 细胞以扩增病毒，最后所得病毒滴度为2.5×10 pfu/ml 。结论：成功构建了携带脂肪储存小滴蛋白5 基因的重组腺病毒载体，为进一步研究LSDP5 基因功能奠定基础。 AdEasy LSDP5 关键词：腺病毒；；小鼠 Q75 Q78 R735.7 A 1673-6273 2011 06-1083-04 中图分类号：，，文献标识码：文章编号：（） Construction and Identification of Recombinant Adenovi