临床微生物及微生物检验 临床标本检验.ppt

临床标本的微生物学检验 血液标本的细菌学检验 目的和意义 正常人的血液是无菌的 一旦怀疑有菌血症，均应及早进行血液标本的细菌学检验 血液标本的采集 采集时间及次数 发热早期或体温上升期 抗菌药物使用前或下次用药前 24h内3~4次，多部位采血 采血部位 肘静脉、股静脉、股动脉 采血量 =1/10血培养瓶中培养基量的 不可从静脉留置针中采取血液标本!!! 血液标本的培养基 需氧菌 硫酸镁肉汤、葡萄糖酚红肉汤 胰化大豆胨肉汤 聚茴香磺酸钠SPS 对氨基苯甲酸、青霉素酶 厌氧菌 硫乙醇酸盐培养基 牛心脑浸液肉汤 血液标本的检验过程 35℃孵育 每天观察一次 一旦发现有细菌生长现象 立即涂片观察，初步报告 立即接种固体平板分离（血平板、巧克力平板） 连续观察七天无菌生长，盲目接种固体平板分离（血平板、巧克力平板）证实无菌生长后报告阴性 血液培养瓶中细菌的生长现象 肉汤均匀混浊，发酵葡萄糖产气————— G-杆菌 微混浊有绿色变化————————— 肺炎链球菌 血球层上面出现颗粒状生长，有自下而上的溶血 ———溶血性链球菌 混浊并有胶冻状凝固—————— 病原性葡萄球菌 表面有菌膜，培养液清晰—————— 枯草杆菌 表面有菌膜，膜下呈绿色混浊——— 铜绿假单胞菌 血液标本检验结果的报告 阳性报告 培养×日有× ×菌生长 阴性报告 培养7日无细菌生长 快速检验的方法 双相培养基法 溶解离心法 荧光指示法 16S rRNA鉴定法 血液中常见的革兰阳性细菌 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群、B群链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、厌氧链球菌 产单核李斯特菌、炭疽芽胞杆菌、产气荚膜梭菌 血液中常见的革兰阴性细菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他布拉汉菌 伤寒及副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、流感嗜血杆菌、气单胞菌、去硝化产碱杆菌、胎儿弯曲菌、沙雷菌、类杆菌、梭杆菌、布鲁菌、鼠疫耶尔森菌 血液标本中特殊细菌的检验 沙门菌属 胆汁葡萄糖肉汤 35℃ 泥砂样沉淀 布鲁菌 Castenada双相培养基 3周后无菌生长 阴性 厌氧菌 厌氧培养瓶 80ml培养基 刃天青指示剂 14天后无菌生长 阴性 有菌生长 厌氧鉴定 脑脊液标本的检验 正常人的脑脊液是无菌的 一旦感染，病情危急 脑脊液标本的采取和运送 由临床医师在无菌条件下采取 无菌容器盛放，立即送检 需要保温35℃ 涂片检查 非常重要 涂片检查 对于新型隐球菌特别是小荚膜者易与白细胞相混淆 0.1%甲苯胺蓝染色 新型隐球菌红色圆球体，荚膜不着色， 白细胞成深蓝色， 红细胞不着色 培养检查 及时接种 巧克力平板、血平板 35℃ 5~10%CO2 18~24小时 脑脊液中的抗酸杆菌检查 离心4000r/min 30min 取沉淀涂片抗酸染色 静置室温18~24小时 结网试验 抗酸染色或金胺O染色 培养 罗-琴培养基或7H-10培养基 脑脊液中的常见细菌 革兰阳性细菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、消化链球菌 结核分支杆菌、产单核李斯特菌 ?新型隐球菌、白色念珠菌 脑脊液中的常见细菌 革兰阴性细菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌 流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克雷白菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、脑膜炎败血黄杆菌、类杆菌 钩端螺旋体 上呼吸道标本的检查 上呼吸道是开放性器官 有许多细菌寄生 奈瑟菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、葡萄球菌、流感嗜血杆菌、类白喉棒状杆菌、真菌 必须注意菌群与疾病的关系 标本采集 鼻咽拭子 咽拭子 涂片检查 白喉棒状杆菌 培养检查 血平板、巧克力平板、EMB 百日咳鲍特菌：鲍金平板 白喉棒状杆菌：吕氏血清斜面 脑膜炎奈瑟菌：巧克力平板（CO2） 流感嗜血杆菌：巧克力平板（CO2） 上呼吸道标本的常见细菌 正常菌群? α和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、四联球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳杆菌 其他奈瑟菌、其他嗜血杆菌 上呼吸道标本的常见细菌 上呼吸道常见致病菌 ?化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 脑膜炎奈瑟菌 白喉棒状杆菌、结核分支杆菌 白色念珠菌 流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌 肺炎克雷白菌、大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 下呼吸道标本的检查 正常下呼吸道细菌情况 对下呼吸道的感染采用痰液标本进行细菌学检查 标本采集 晨痰 方法： 自然咳痰法 气管镜下采集 气管或环甲膜穿刺 需避免上呼吸道正常菌群的污染 涂片检查 培养检查 标本前处理 均质化法 洗涤法 分离培养 血平板 巧克力平板 沙保弱琼脂 特殊培养 下呼吸道标本的常见细菌 革兰阳性细菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 白喉