临床标本的细菌学检验1.ppt

临床标本的细菌学检验 新乡医学院第一附属医院检验科 周艳君 血液标本的细菌学检验 目的要求 1.掌握血液标本的细菌学检验程序、方法和 注意事项。 2.掌握血液标本中常见细菌的检验技术。 器材和试剂 1. 标本 疑为菌血症患者的血液标本。 2. 培养基 硫酸镁葡萄糖肉汤、胆汁葡萄糖肉汤、 硫乙醇酸钠肉汤、羊血琼脂平板、 巧克力琼脂平板、厌氧血琼脂平板、 KIA、MIU、甘露醇发酵管等。 3. 试剂 3％过氧化氢、氧化酶试剂、革兰染色液、 5g／片新生霉素药敏纸片等。 4. 其他 沙门菌属诊断血清、新鲜人或兔血浆。 步骤和方法 1. 标本采集 (1)采集原则 怀疑为菌血症的患者在发病初期或体温上升期采集；原则上应在抗生 素使用前采集，对已开始抗生素治疗的患者可在下次给药前采集。 (2)皮肤消毒：三步消毒法（70%酒精、碘酒、70%酒精） (3)采血部位：大多肘静脉采集，亚急性细菌性心内膜炎患者股动脉采集。 (4)采血量：成人10～20ml?次，儿童3～5ml?次。 血液与培养基比例应为1：5-1:10。 (5)血培养次数及采血时间 24h内小于3次培养，在抗生素治疗或改变前1-2h采集。 急性脑膜炎、骨髓炎、关节炎、细菌性肺炎和肾盂肾炎发热患者，不 同部位2次培养；急性心内膜炎患者不同部位3次培养；亚急性心内膜 炎患者24h内隔1续3采血培养，24-48h全部阴性者再采集2-3次培养。 菌血症患者血液中病原菌具有周期性出现和浓度水平低两个特点，要求 临床多次采集标本进行肉汤增菌培养。 2.检验 程序 3. 常见致病菌检验及报告方式 (1) 将血液细菌培养瓶置35℃孵育箱中孵育，每日 观察1次，连续观察至第7天。 注意血液细菌培养瓶的变化。 (2) 如怀疑血液细菌培养瓶中有细菌生长，无菌技 术取瓶内液体进行涂片，革兰染色检查，发现 细菌，根据细菌的染色性及形态特征发出初步 报告（电话通知医生）。 (3) 根据涂片结果选择相应抗菌药物，直接从血培 养瓶抽取适量液体做初步药敏试验，于18～24h 后报告初步药敏结果（电话通知，报告敏感抗 生素。）。 (4) 如有发现培养液混浊、溶血、绿色色素、表面菌 膜生长、胶冻状凝固或细胞层颗粒状生长，均为 细菌生长现象。用无菌技术取瓶内液体接种固体 培养基。需氧培养瓶接种羊血琼脂平板、巧克力 血琼脂平板，前者做普通需氧培养，后者放入到 5％CO2 环境35℃孵育24h，同时接种真菌培养基 进行真菌培养；厌氧培养瓶接种厌氧血琼脂平板 和羊血琼脂平板，前者置厌氧环境进行35℃48h 厌氧培养，后者做普通需氧培养。 观察菌落生长情况。 (5) 对细菌菌落涂片、革兰染色，观察细菌形态及染 色性。如为革兰阴性杆菌，进行氧化酶试验并接 种KIA培养基，氧化酶阴性并发酵葡萄糖，初步判 断为肠杆菌科细菌；KIA、 MIU培养基上的生化 结果符合沙门菌属者，用沙门菌属诊断血清做玻 片凝集后确认血清型；KIA、MIU培养基上的生化 结果符合肠杆菌科其他菌属，血液中常见革兰阴 性杆菌的初步鉴定见表5-1-1，全面鉴定参见第二 章第二节进行鉴定；氧化酶试验阳性或阴性，不 发酵或不利用葡萄糖者，疑为非发酵菌，参见第 二章第三节进行鉴定。 (6)对细菌菌落涂片、革兰染色，如为革兰阳性球菌，葡萄串样或散在排列，触酶试验阳性，初步判断为葡萄球菌属；触酶试验阴性，链状、散在或成双排列，初步判断为链球菌属或肠球菌属。 参见第二章第一节进行鉴定。 7.报告方式： 在增菌过程中培养瓶中怀疑有细菌生长，经涂片、革兰染色证实，可报告“疑有××细菌生长”；经分离培养、生化试验及血清学鉴定后，可报告“血液细菌培养×天，有××细菌生长”，并同时报告体外抗菌药物敏感试验结果； 如果增菌培养至7天，培养瓶中仍无细菌生长迹象，经盲目传代证实无细菌生长，可报告“血液细菌培养7天，无细菌生长”。 8.血液标本常见的病原菌见表5-1-2。 教材第149页。 注意事