基于激光共聚焦同步双扫描技术的LC3脱乙酰化修饰-激光生物学报.PDF

第２６卷第４期 激　光　生　物　学　报 Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．４ 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 ２０１７年８月 ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ Ａｕｇ．２０１７ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７７１４６．２０１７．０４．００５ 基于激光共聚焦同步双扫描技术的ＬＣ３  脱乙酰化修饰调控自噬的机理研究  尹　伟，方三华，吴航军 ，刘双双，肖桂凤 （浙江大学医学院公共技术平台，浙江杭州３１００５８） 摘　要： 激光共聚焦同步双扫描（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ，ＳＩＭ）技术在常规扫描单元的基础上，引入一个同步扫描单元 （ＳＩＭｓｃａｎｎｅｒ），该技术独立控制了两个激光束，一个用于激光光刺激，另一个用于同步成像。本实验中，采用激 光共聚焦同步双扫描系统的４０５ｎｍ和４８８ｎｍ激光分别对细胞的特定部位进行刺激和同步成像，实时检测了 ＬＣ３复合物的形成，记录并分析了乙酰化前后ＬＣ３的光动力学变化过程，证实了ＬＣ３的脱乙酰化修饰是自噬性 降解所必须的，本实验体系为激光共聚焦双扫描技术的推广提供了一个很好的平台。ＳＩＭ技术的应用，解决了 刺激过程无法成像的问题，为漂白后荧光恢复（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｃｏｖｅｒｙａｆｔｅｒｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ，ＦＲＡＰ）、漂白后荧光损 失（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｌｏｓｓｉｎｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ，ＦＬＩＰ）和光诱导激活等研究提供了最佳的解决方案，可作为光刺激的一种 实验模式在很多实验设计中进行延伸应用。 关键词： 同步双扫描；漂白后荧光恢复；脱乙酰化修饰 中图分类号： Ｒ３１８．５１ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７７１４６（２０１７）０４０３０９０５ ＡＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬＣ３Ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｉｎ ＲｅｇｕｌａｔｉｎｇＡｕｔｏｐｈａｇｙＢａｓｅｄｏｎＬａｓｅｒＳｃａｎｎｉｎｇＣｏｎｆｏｃａｌ ＭｉｃｒｏｓｃｏｐｙｗｉｔｈＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓＳｃａｎｎｅｒ  ＹＩＮＷｅｉ，ＦＡＮＧＳａｎｈｕａ，ＷＵＨａｎｇｊｕｎ ，ＬＩＵＳｈｕａｎｇｓｈｕａｎｇ，ＸＩＡＯＧｕｉｆｅｎｇ （ＣｏｒｅＦａｃｉｌｉｔｉｅｓ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５８，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ（ＳＩＭ）ｓｃａｎｎｅｒｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｓｂａｓｅｄｏｎａｎａｄｄｉｔｉｏｎａｌｃｏｍｐａｃｔｓｃａｎｎｉｎｇｕｎｉｔｕｓｅｄｔｏｓｙｎ ｃｈｒｏｎｉｚｅｌａｓｅｒｌｉｇｈｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｃｏｎｆｏｃａｌｉｍａｇｉｎｇｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｕｓｅｄ４０５ｎｍｌａｓｅｒｆｏｒｌｉｇｈｔｓｔｉｍｕ