对悬浮离心法回收昆虫病原线虫方法的改进Ξ.PDF

　中国生物防治 CH INESE JO URNAL O F B IOLO G ICAL CO NTROL 　 1995, 11( 1) 13～ 16　 对悬浮离心法回收昆虫病原线虫方法的改进 简　恒　　杨怀文　　张乃鑫 ( 中国农科院生物防治研究所, 北京　 100081) [摘要]　本文对 Saun der s 的悬浮离心回收线虫法进行了改进研究。保留第1次离心后上清液中 含有的线虫, 结果使小卷蛾线虫的平均回收率由32. 2% 上升到60. 2% ; 离心处理对线虫的存活率 及其对害虫的侵染率没有显著影响, 但鞘的保持率有所降低。用浓度为200 盐液替代了浓度为 g L 454 的糖液, 对线虫回收率无影响, 但成本可以降低。 g L 关键词 　 小卷蛾线虫　 悬浮离心法 　 悬浮液 昆虫病原线虫个体小, 不能直接从土壤中对其进行观察, 因此欲研究线虫在土壤中的生 物、生态学, 首先要有一套准确一致从土壤中回收线虫的技术。目前, 大蜡螟诱集法、波曼漏斗 法、悬浮离心法是3种常用的从土壤中回收昆虫病原线虫的方法。悬浮离心法利用比重较大的 溶液, 机械地将线虫从土壤中分离出来, 此技术的特点是线虫回收率较稳定, 易于掌握。据 Saun der s ( 1982) 等报道, 利用 比重为 1. 18 的糖液作为悬浮液 回收小卷蛾线虫 A ll 品系 ( S tein ernem a ca rp ocap sae A ll) , 其回收率为45. 8% , 但回收率仍偏低, 且糖液成本也较高, 为 此, 本文对 Saun der s 回收方法进行了改进研究, 现报道如下。 1　材料和方法 本试验以小卷蛾线虫A g r io to s 品系为材料, 比较 Saun der s 的悬浮离心回收法与改进的 ( ) 悬浮离心回收法 以下简称改进的回收法 的回收率。 小卷蛾线虫A g r io to s 品系从澳大利亚引进, 采用B edd in g ( 1984) 的离体培养法培养, 收 获后存于4 ℃冰箱中备用。 1. 1　回收线虫过程的改进 1. 1. 1　Saun der s 回收法 ( 1) 土壤液的制备: 将100 含一定数量线虫的土壤放入300 烧杯中, 加入150 自来 g mL mL 水, 充分搅拌, 静置30秒钟后, 将土壤混浊液倒入离心管, 再往杯中加150 自来水, 再搅拌1 mL 次, 合并两次混浊液, 倒掉土壤。 (2) 第1次离心: 将合并的土壤混浊液在2000 的转速下离心5分钟, 倒掉上清液 , r m in A 留下沉淀物 。 B 注: 国家“八五”科技攻关研究内容。 — 13 — ( ) ( ) 3 第1次悬浮离心: 将100 糖溶液 蔗糖454 , 比重为1. 18, 波美度20度 加入经第 mL