北林园林植物组培组培第四章笔记(仅供复习)北林园林植物组培组培第四章笔记(仅供复习).pdf

第四章 基本操作 第一节 培 养 基 的 制 备 何一种培养基都是由多种化合物组成， 如每次配制培养基时现配现用，影响工作 效率；为减少工作量，一般常将同类 药品扩大一定的倍数后，配制成浓缩液亦称母液， 置冰箱中保存，可供多次使用 。 一、母液的配制 母液的配制是把培养基中同一大类的成分按用量配制到一起，分为： 大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 有机物类母液 也可将维生素和氨基酸类分别单独配制。 大量元素母液的配制（MS ） 微量元素母液的配制(MS) 铁盐的配制 有机化合物的配制 生长调节物的配制 生长调节物质的每一种均要单独配制。绝大多数生长调节物质不 于水，须加入 酒精、盐酸或碱促 。 生长素类 IAA 、NAA 溶于95 ％的乙醇。 IBA 溶于50 ％的酒精。 2 ，4 －D 溶于1N NaOH 。 GA3 于酒精 细胞分裂素 KT 、6 －BA 溶于1NHCl Zt 溶于95 ％酒精 生长调节物质的用量极微，其浓度通常以 mg/mL 表示。 一般配制成0.1 － 1.0mg/mL 的 液。称量、溶解后定容至所需的容量，贴好标签，著名名称、浓度 （mg/mL ）、配制日期，存放于冰箱的冷藏室中，随用随取。 二、培养基的配制 糖 ∣ 琼脂 → 混合 → 化 →定容→调PH值 ∣ 药 （各种母液） 1 、配制培养基时，先将已配好的各种母液从冰箱中取出，按顺序排好； 准备好所需的烧杯、量筒等。 2 、根据所配制的培养基配方及体积数，称取琼脂和蔗糖，用少量的蒸 馏水 化。 3 、计算所需各种药品母液的用量，按大量元素、微量元素、铁盐、有 机物、生长调节 物质母液的顺序依次吸取，混合在一起。 4 、将混合到一起的各种母液倒入已 化的琼脂、糖 液中，定容至 所需的体积 5 、测定PH值，按培养的植物材料对PH值的要求，用1N HCl或 1N NaOH调节所需 的PH值，在培养基凝固前，分装到培养瓶中并封口。 6 、置高压灭菌锅中进行高压灭菌。 三、培养基配方的表达 MS+6-BA +IBA . +糖3.0% ( PH 5.8 ) 1.0 0 1 含义：1、基本培养基为 MS 2 、 6-BA1.0 即：每升培养基加入6-BA 1.0mg 3 、 IBA . 即：每升培养基加入IBA0.1mg 0 1 4 、每升培养基加糖30g 二节 无菌培养体系的建立 一、外植体的种类及选择 ： （一）外植体的种类 1、带芽的外植体 2 、分化的器官和组织 3、胚 4 、花粉和花药 5、球茎、鳞茎、块茎 11/1 １／ 1特点： 形态已基本建成，生长速度快； 遗传性稳定； 适于离体快繁； 可获得脱毒苗。 包括茎尖的顶芽、腋芽、根茎连接处的萌蘖等是组织培养中应用最多的取材部 位。 2、分化的器官和组织 包括：嫩茎、嫩叶、形成层、根、花瓣、花萼等二倍体组织。 这些已 经分化的组织经诱导后可以过渡到脱分化的状态，形成芽体或胚状体，得 到完整的植株。花卉中用叶、花 瓣、花萼作为外植体的情况比较多。 特点：易发生遗传变异，不利于保持原种性；但可以扩大材料来源， 提高繁殖率。 3、胚 指自然状态下成 胚和未成 胚的培