大肠杆菌转运蛋白SstT和RhtC的改造对L-苏氨酸产量的影响大肠杆菌转运蛋白SstT和RhtC的改造对L-苏氨酸产量的影响.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.4 大肠杆菌转运蛋白SstT和RhtC的改造对 L-苏氨酸产量的影响 1 1 1 2 2 1 1 梁媛 ，杨书尧 ，刘宏亮 ，郝小明 ，林海龙 ，谢希贤 ，陈宁 （1.天津科技大学生物工程学院，天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室，代谢控制发酵技术国家地方联合工程 实验室，天津 300457）（2.中粮营养健康研究院有限公司，北京 100020） 摘要：L-苏氨酸是一种必需氨基酸，广泛应用于食品、医药和饲料等领域。有报道表明降低胞内 L-苏氨酸浓度，解除其对合成 途径酶的反馈作用，有利于提高 L-苏氨酸产量，因此，本实验利用Red 重组技术和基因过表达技术，以L-苏氨酸生产菌Escherichia coli TRFC 为出发菌株，成功构建了TRFCΔsstT 和 TRFCΔsstT+pSTV28-rhtC。摇瓶发酵结果显示，与原菌相比，TRFCΔsstT 的L-苏氨酸 产量较原菌提高了 4.00% ，TRFCΔsstT+pSTV28-rhtC 的L-苏氨酸产量较TRFCΔsstT+pSTV28 提高了 18.16%。此外，经检测发现重组 菌株胞内L-苏氨酸浓度均低于原菌。最后进行了TRFCΔsstT+pSTV28-rhtC 的5 L 分批补料发酵实验，其 L-苏氨酸产量及糖酸转化率 分别较原菌提高了 15.33%和 16.14%。综上所述，通过改造L-苏氨酸转运系统的 SstT 和 RhtC 蛋白，能有效地增强细胞内 L-苏氨酸外 排能力，降低细胞内 L-苏氨酸的浓度，进而有利于L-苏氨酸产量的提高。 关键词：大肠杆菌；L-苏氨酸；吸收转运蛋白；输出转运蛋白 文章篇号：1673-9078(2014)4-99-103 Effect of Transport Proteins SstT and RhtC Modification on L-threonine Production in Escherichia coli 1 1 1 2 2 1 1 LIANG Yuan , YANG Shu-yao , LIU Hong-liang , HAO Xiao-ming , LIN Hai-long , XIE Xi-xian , CHEN Ning (1.College of Biotechnology of Tianjin University of Science and Technology, Tianjin Engineering Lab of Efficient and Green Amino Acid Manufacture, National and Local United Engineering Lab of Metabolic Control Fermentation Technology, Tianjin 300457, China) (2.COFCO Nutrition and Health Research Institute Co., Ltd., Beijing 100020, China ） Abstract: L-threonine is an essential amino acid and has wide application in food, pharmaceutical and feed fields. It has been reported that the reduction of the intracellular L-threonine concentration could remove the feedbacks on the e