微量克氏定氮法微量克氏定氮法.ppt

微量克氏定氮法 相关知识 蛋白质含氮量：约为16% 蛋白质系数：1g氮所代表的蛋白质量为6.25。 实验目的 掌握克氏定氮法测定蛋白质含量的原理和方法。 学会使用克氏定氮仪。 实验原理 CH2COOH ? + 3H2SO4 ? 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1) NH2 ? 2NH3 + H2SO4 ? (NH4)2SO4 　　　 (2) 加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点 ，后期加入双氧水以缩短消化时间。 (NH4)2SO4+ 2NaOH ?2H2O + Na2SO4 + 2NH3 (3) 2NH3　+　4H3BO4　?　(NH4)2 B4O7　+　5H2O (4) 葡萄紫?浅绿 (NH4)2B4O7 + 5H2O + HCl ? 2NH4Cl + 4H3BO4　 (5) 浅绿? 葡萄紫 实验仪器、材料和试剂 （一）仪器 微量克氏定氮仪、控温消煮炉、酸式滴定管、50ml容量瓶、150ml三角瓶等。 （二）材料 酱油、酸奶、纯牛奶等。 （三）试剂 1．浓硫酸（A.R） 2．35% NaOH溶液（入桶中） 3．2%硼酸溶液：混合指示剂＝100：1入桶中 4. 0.05N标准盐酸溶液 实验操作步骤 （一）消化（两组一份） （二）定溶　将消化液用蒸馏水在50ml容量瓶中。 （三）蒸馏 （四）滴定 实验结果与讨论 计算100ml样品中粗蛋白质含量。 式中 c：盐酸标准溶液的浓度（mol/L） V1：样品消化液消耗标准酸的体积(mL) V2：空白消化液消耗标准酸的体积（mL） 14：氮原子量（g/ mol） F：蛋白质的换算因子（一般用6.25） 　　m：样品的质量（g）或体积（mL）数。 * 1. 加入1ml样品、硫酸钾和硫酸铜的混合物200~300mg、浓漏硫酸2~3ml、放上小斗。 2.全班做一份空白样 3.放置到控温消煮炉上，调温、至呈透明浅绿色 取5ml消化液入凯氏烧瓶 加碱、加酸、开始蒸馏。 蒸馏至三角瓶中液体呈现浅绿色，保持3分钟 凯氏定氮仪的调试 取150ml的三角瓶 样品中蛋白质的含量(％)＝ C（V1—V2）×14/1000×F m×5/50 ×100