乙醛激活肝星状细胞中Wnt与TGFβ信号通路的Crosstalk研讨.pdf

Y1784707 目 录 乙醛激活肝星状细胞中Wnt与TGF-p信号通路的Crosstalk 研究………………………………………………………………l l■ 1 中文摘要…………………………………………………………1 l● 2 英文摘要…………………………………………………………4 1● 3 前言………………………………………………………………8日U吾………………………………………………………………葛 1● 4 材料与方法………………………………………………………1l 1● 5 结果………………………………………………………………18 1● 6 讨论………………………………………………………………26 l● 7 结论………………………………………………………………31 1 8 参考文献…………………………………………………………32 l 9 英汉缩略词对照表………………………………………………35 1、l 致谢………………………………………………………………36 3 Wnt信号通路与组织器官纤维化………………………………37 肝、心脏以及皮肤等组织器官纤维化的发生与进展关系密切‘1。41。本 细胞活化中交叉对话(crosstalk)的可能机理，然后从肝星状细胞活 化程度的角度观察两条通路crosstalk的功能效应。首先，乙醛刺激 HSC细胞株，通过VG染色法从形态学角度观察HSC活化程度；MTT 及纤维粘连素FN含量，证明乙醛能有效刺激肝星状细胞株活化。接 着采用SB．43 1542特异性阻断TGF．p信号通路，Westemblotting检 Westem 阻断GSK．3p，进一步激活Wnt途径， bloting检测TGF—p通 方法：．(1)HSC．T6细胞株分为未处理组(阴性对照组)，乙醛激活 1542处理组 活+TDZD．8处理组(Wnt激活组)，乙醛激活+SB．43 胞培养至融合度70％．80％时，0．4％胎牛血清DMEM培养基同步化 处理细胞12h后，更换为10％胎牛血清DMEM完全培养基。对照 组用对应的抑制剂处理培养，刺激组在对应的抑制剂预处理1h后 给予乙醛刺激(终浓度200“mol／L)刺激，每12h补加一次，刺激 分离，westem Blotting检测各目的蛋白含量，检测指标包括：Wnt One分析软件进行处理，对不同受体 上蛋白条带灰度，采用Quantity 拮抗剂或激活剂作用后各蛋白磷酸化水平的改变进行分析。(2)分 组同(1)，所有细胞均在6孔板中爬片，细胞处理方案同(1)，待 处理完毕，将细胞爬片做VG染色，显微镜下观察及照相。细胞培养 (3) 上清液做ELISA检测纤维粘连素FN和胶原蛋白I含量变化。 将96孔板接种HSC．T6细胞株，分组同(1)，每组设3复孔，细胞 处理方法同(1)，光镜下观察细胞生长状况，MTT法检测细胞活性。 结果：(1)乙醛激活HSC细胞株后，MTT法检测细胞增值活性明显 上升，ELLSA检测出纤维粘连素FN和胶原蛋白I以及平滑肌动蛋白 a．SMA含量均有不同程度的增多，VG染色示胶原含量增多，说明酒 精的代谢产物乙醛对肝星状细胞的活化有明显的刺激作用。 (2)使 SB431 结论： (1) 。 其分泌产物I型胶原蛋白及纤维粘连素明显增多，细胞增殖并转分 ． 化。