油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建_张中林油菜叶绿体基因组同源重组片段的克隆及phb基因定点整合载体的构建_张中林.pdf

植物生理学报, A cta Phytop hy siologica Sinica 　2001, 27(3):235～242 235 phb 1 ＊ 2 ＊＊ 1 1 2 1 张中林 　张景昱 　李轶女 　苏　宁 　宋艳茹 　沈桂芳 1 2 (, 100081;, 100093) :利用叶绿体基因组在进化过程中高度保守的特 3-phbA ( 1999)、 点,根据烟草、水稻和玉米叶绿体基因组全 列资料, CoA phbB PHB phbC ( 设计合成引物, PCR 扩增并克隆了油菜叶绿体两 个重 1995), 要的功能基因 rbcL 和 atpB (GenBank 登录号分别为 , AF267640 和AF267641), 并以此作为定点整合外源基 (2000)。 因的同源重组片段。以来自叶绿体的强启动子 PpsbA 。 和Prrn 等驱动PHB 合成途径中3 个关键酶基因phbA、 ,, phbB 和phbC,分别构建表达盒, 并将它们按照其在原 PHA。 始菌株中的自然转录顺 phbC-phbA-phbB 相串联, 最 后连同选择标记基因aadA 表达盒 一起, 克隆到油菜 CoA (Houmiel 1999)、 叶绿体同源片段中, 构建成phb 基因定点整合载体 (Mittendorf 1998,Hahn 1999) pRCAB 和 pRCABF。酶切及Southern 杂交结果证明所 (Mittendorf 1998)。 构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工 PHA , 。 作目前正在进行之中。 , PHA :phb 基因, 叶绿体转化, 同源片段, 定点整合, , 油菜 。phb :Q78 , 　　 -3- (polyhydroxyalkanoate, 。 PHA), , , phb 。 (Madison Huisman 1999)。 phb 。 , PHA 。PHA 1　 , 1.1　 , , 。 (Brassica napus cv.H165) 。(+), 1992 , PHB(polyhydroxy- ,26 ℃、16 h/8 h、 butyrate)