微生物对有机物降解及转化能力的定性分析.docVIP

微生物对有机物降解及转化能力的定性分析 监测1035班 第二课堂第一组 组员： 摘要： 自然界中化学物质的降解一般可分为3种方式：?光降解、?化学降解及生物降解。 动物、植物和微生物能分解各种有机物，特别是微生物能通过它的代谢活动，发生氧化还原、脱羧基、脱氨基、加水分解、脱水、酯化等种种反应。因此，自然界化学物质的降解虽然常是上述3种方式交叉进行的，但其中与微生物降解作用的关系最大。 引言： 环境中存在的各种天然产物，特别是有机物，几乎都能找到可以使之降解或转化它的微生物。然而由于近几十年来许多人工合成的化合物，是自然界中原来所没有的。因此不可能存在有作用于它们能使之分解的微生物和酶系，甚至对微生物还有杀灭作用。 由于微生物个休小、繁殖迅速、比表面大等特点。它们较之其它生物更易适应环境，并可通过自然灾变产生新菌种，产生新的酶系统，具有新的代谢功能，从而可参与对人工新合成化合物的降解与转化作用。因此微生物对降解污染物具有巨大潜力。 例如已发现多种微生物对合成有机物的降解作用： 酚类已发现降解细菌有30个属，66种 卤素有机物降解细菌有27个属，40种 合成含氮有机物降解细菌有18个属，36种 合成表面活生剂降解细菌有18个属，43种 石油烃类降解细菌有100多个属，200多种 一、材料与方法： 1.菌种： 枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌 2. 溶液、试剂和仪器： 卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、无菌平板、无菌试管、接种环、试管架、滴瓶、滴管、无菌平板、无菌试管、接种环、试管架、滴瓶、滴管 3.培养基： 3.1蛋白胨水培养基的配制： 配方：蛋白胨10g，氯化钠 5g，水 1000mL，pH值7.6 制法：按上述成分配制,分装小试管,每管10ml，121℃高压灭菌20min。 3.2淀粉培养基的配制： 配方：蛋白胨10g，氯化钠5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，蒸馏水1000ml，琼脂15-20g 制法：先将可溶性淀粉加少量蒸馏水调成糊状，再加入到熔化好的培养基中调匀121℃高压灭菌20min。 3.3油脂培养基的配制： 配方：蛋白胨10g，氯化钠5g，牛肉膏5g，香油或花生油10g，中性红（16%水溶液）约0.1ml，琼脂15-20g，蒸馏水1000ml，pH值7.2 制法：按上述成分配制，0.1MPa下灭菌20min。 3.4柠檬酸铁铵半固体培养基的配制： 配方：蛋白胨20g，氯化钠5g，柠檬酸铁铵0.5g，硫代硫酸钠0.5g，琼脂5-8g，蒸馏水1000ml，pH值7.2 制法：按上述成分配制，0.1MPa下灭菌20min。 3.5葡萄糖蛋白胨培养基的配制 配方：蛋白胨10g，葡萄糖5g，K2HPO42g，蒸馏水1000ml，pH值7.0-7.2， 制法：按上述成分配制,过滤，分装小试管,每管10ml，112℃高压灭菌30min。 三、包扎与灭菌： 将配制好的培养基、培养皿以及所需的物品放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌，注意物品不能放得太满，要平放，以免培养基倒出。 四、实验原理： 4.1甲基红（M.R）试验： 某些细菌在糖代谢过程中生成丙酮酸，有的甚至进一步被分解为甲酸、乙酸、乳酸等，而不是生成V－P试验中的二乙酰，从而使培养基的pH下降至4.5或以下（V－P试验的培养物pH常在4.5以上），故加入甲基红试剂呈红色。本试验常与V－P试验一起使用，因为前者呈阳性的细菌，后者通常为阴性。 4.2吲哚试验： 有些细菌可以分解色氨酸生成吲哚可以与二甲基氨基苯甲醛反应生成红色的玫瑰吲哚，因此可根据细菌能否分解色氨酸产生吲哚来鉴定菌种。 在培养液中加入乙醚1～2ml，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂(加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察)，如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“+”、阴性用“-”表示。 4.3乙酰甲基甲醇（V.P）试验： 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。 4.4淀粉水解试验 淀粉遇碘呈蓝紫色，在淀粉酶的作用下，淀粉可分解为遇碘不显色的糊精等小分子物质。 因而可以根据培养基再加碘液后颜色的变化来观察淀粉水解的情况。 4.5脂肪水解试验 脂肪是由甘油和各种脂肪酸组成的。某些种类的细菌能产生脂肪酶水解脂肪形成甘油和脂肪酸，脂肪酸与中性红结合形成红色斑点。脂肪酸也可以与重金属盐如硫酸铜反应形成浅绿-蓝色的沉淀。 4.6H2S产气试验 某些细菌能分解含硫有机物，如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等产生硫化氢，硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐时，会形成黑色