LPS对裸鼠胆管细胞癌移植癌的抑制作用.docVIP

精品论文 参考文献 LPS对裸鼠胆管细胞癌移植癌的抑制作用 1湘潭市第一人民医院普外3科 411101；2赣南医学院附属医院普外2科 341000 摘要：目的：观察LPS通过调节趋化因子12的受体对裸鼠胆管癌移植瘤杀伤效应。方法：皮下接种QBC939建立裸鼠胆管癌移植瘤模型，瘤内注射LPS，同时肌肉注射青霉素抑制LPS导致的炎症反应，每3天测量肿瘤体积，描绘肿瘤生长曲线。实验结束后处死裸鼠，剥离肿瘤，测量体积大小。结果：对照组全部接种部位均有移植瘤生成，且肿瘤体积大，成瘤率为100 %（8/8）；试验组成瘤率为87.5 %（7/8），移植瘤生长缓慢，瘤体小。经过28 天的治疗，试验组移植瘤的生长速度明显低于对照组，对照组于接种细胞后12天触及肿瘤，而试验组平均为15天，且生长较慢。试验组与对照组相比，肿瘤生长受到抑制（Plt;0.05）。结论：LPS可明显抑制裸鼠胆管癌移植瘤的生长，具有胆管癌基因治疗的可行性。 关键词：胆管癌；CXCR4；脂多糖；基因治疗 趋化因子是一类可诱导的促炎细胞因子，CXCL12（即基质细胞衍生因子1 stromal cell derived factor-1，SDF-1）属于趋化因子家族，CXCR4是CXCL12的特异性的唯一受体，与肿瘤的生长、趋向性侵袭、转移及预后相关，应用CXCR4抑制剂已应用于肿瘤的基因治疗。本实验选用人胆管癌细胞株QBC939，在BALB/C（nu/nu）裸鼠皮下建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型，观察局部注射LPS对移植瘤生长的影响，以期在整体水平对LPS的作用作出评价。 材料和方法 1材料：人永生化胆管癌细胞系QBC939，由第三军医大学西南医院肝胆外科中心王曙光等建株。胰蛋白酶：购自湘雅医学院细胞中心。新生小牛血清：购自天津灏洋生物工程有限公司。 2试验方法：（1）实验动物：BALB/C（nu/ nu）裸鼠共16只，4～5 周龄，体重18～22 g，均为雄性，由中南大学湘雅医学院动物中心提供，饲养于SPF级无菌饲养室，用高压灭菌的饮用水和饲料定期喂养。 （2）细胞培养：人胆管癌细胞株QBC939，用含10％ 小牛血清的RPMI 1640培养液，于37℃，5％CO2浓度的培养箱中培养，0.25％的胰蛋白酶消化传代。 （3）实验分组：裸鼠16 只，随机分成对照组、试验组，每组8 只。 （4）人胆管癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立：体外培养胆管癌细胞QBC939，取对数生长期细胞，洗涤、清除死亡脱落的细胞。0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞，含10%新生牛血清的RPMI-1640细胞培养液中和胰酶并重悬细胞，充分吹散细胞后计数。室温下1500rpm离心，弃上清。用不含血清的RPMI-1640细胞培养液充分洗涤细胞2次，以去除可能诱发裸鼠体内非特异性免疫反应的血清成分。离心，沉淀，用少量不含血清的RPMI-1640重悬成高溶度的细胞悬液。调整细胞浓度，使细胞数达到5times;107/ml。将每只裸鼠给予0.2m1细胞悬液接种右腋皮下（附图1）。当肿瘤长至直径4-5mm时，即认为成瘤。各组的不同治疗：在接种48 h后，试验组每只裸鼠于接种部位皮下缓慢注射1ug/ kg 体重的LPS，同时肌肉注射青霉素抑制LPS导致的炎症反应；对照组同法注射等量生理盐水和青霉素，隔日1次，共14次。 （5）人胆管癌裸鼠皮下移植瘤体积和重量的测量：每3天测量肿瘤最长径（L）和横径（S），换算出肿瘤的体积V[V（mm3）= 0.5times;Ltimes;S2]。治疗结束后处死裸鼠，取肿瘤称瘤重，肿瘤生长抑制率计算公式如下：抑瘤率（%）=（1 - 治疗组瘤重/ 对照组瘤重）times;100 %。 （6）统计学处理：数据均以均数plusmn;标准差（plusmn;s）表示。使用SPSS13统计软件包处理数据。各组间比较应用t检验及单因素方差分析，Plt;0.05认为差别有显著性。 结果 1．人胆管癌裸鼠皮下移植瘤模型的成功建立 各组裸鼠皮下接种人胆管癌细胞株QBC939单细胞悬液后均存活并有肿瘤形成，局部接种点无红肿破溃表现，皮下移植瘤随时间逐渐增大，15只裸鼠中均有明显移植瘤形成，模型建立的成功率为93.75％（15/16），瘤块呈现出不规则结节状，色灰白，与周围组织分界较清晰，质硬。 2 LPS治疗抑制肿瘤的生长 2.1LPS 对裸鼠人胆管癌移植瘤生长的影响： （1）成瘤性：对照组全部接种部位均有移植瘤生成，且肿瘤体积大，成瘤率为100%（8/ 8）；试验组成瘤率为87.5 %（7/8），移植瘤生长缓慢，瘤体小（附图1、2）。 （2）移植瘤在裸鼠皮下的生长与瘤重的变化：经过28 天 的治疗，试验组移