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人胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养 解剖学报 2000年第2期第0卷 短篇报道 作者：侯敏　陈元方　柯杨　孔燕国　陆国钧 单位：侯敏　陈元方　孔燕国　陆国钧（中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化内科，北京 100730）；柯杨（北京医科大学北京市肿瘤医院，北京 100034） 关键词：原代培养；传代培养；人胰腺导管上皮细胞 　　【摘要】　目的　完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养，建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。　方法　用含有胶原酶IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种，接种的细胞团用含10%胎牛血清、4.0mmol/L谷氨酰胺、0.01%大豆胰酶抑制剂、0.02%牛血清白蛋白、5.0mg/L牛脑垂体提取物、2.5×10-3mg/L表皮生长因子、25.0×10-2mg/L霍乱毒素、5.0mg/L胰岛素、10.0mg/L转铁蛋白、1.0mg/L地塞米松、50mg/L庆大霉素的完全培养基培养24h后，换含2%胎牛血清的完全培养基继续培养，在细胞团达到80%～90%的细胞汇合时，1∶2传代培养。　结果　获得的原代培养细胞不含有淀粉酶，表达细胞角蛋白，可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞已传代培养到第3代。　结论　我们的原代培养和传代培养的方法、条件适宜于胰腺导管上皮体外细胞培养。完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养，建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。　方法　用含有胶原酶IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种，接种的细胞团用含10%胎牛血清、4.0mmol/L谷氨酰胺、0.01%大豆胰酶抑制剂、0.02%牛血清白蛋白、5.0mg/L牛脑垂体提取物、2.5×10-3mg/L表皮生长因子、25.0×10-2mg/L霍乱毒素、5.0mg/L胰岛素、10.0mg/L转铁蛋白、1.0mg/L地塞米松、50mg/L庆大霉素的完全培养基培养24h后，换含2%胎牛血清的完全培养基继续培养，在细胞团达到80%～90%的细胞汇合时，1∶2传代培养。　结果　获得的原代培养细胞不含有淀粉酶，表达细胞角蛋白，可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞已传代培养到第3代。　结论　我们的原代培养和传代培养的方法、条件适宜于胰腺导管上皮体外细胞培养。 　　【中图分类号】　R322.4+91;R329.2【文献标识码】　A 　　【文章编号】　0529-1356(2000)02-180 PRIMARY CULTURE AND SUBCULTURE OF HUMAN 　　PANCREATIC DUCTAL CELLS HOU Min,CHEN Yuan-fang,KONG Yan-guo, LU Guo-jun 　　（Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,PUMC Hospital,Department of Gastroenterology,Beijing 100730；） 　　KE Yang 　　（Beijing Medical University,Beijing Institute for Cancer Research,Bijing 100034,China） 　　【Abstract】　Objective To establish a normal pancreatic ductal epithelial cell line for further study.Methods The human fetal pancreas was dispersed with the solution containing collagenase type IA. Then cells were maintained in a complete media consisting of 10% fetal bovine serum(FBS), 4.0mmol/L glutamine, 0.01% soybean trypsin inhibitor, 0.02% bovine serum albumin, 5.0mg/L bovine pituitary extract, 2.5×10-3mg/L epithelial growth factor, 25.0×10-2mg/L cholera toxin, 5.0mg/L insulin, 10.0mg/L transferrin, 1.0mg/L dexamethasone, and 50mg/L gentamycin. Twenty-four hours later, they were cultured successivel