从草原土壤分离到ziwulingensis.docx

从草原土壤分离到Streptomyces ziwulingensisYan Bing Lin1 ，Xin Ye Wang1 ，Ting Ting Wang1 ，Shao Shan An2 ，Peng Shi1 ，Ge Hong Wei11College of Life Sciences, State Key Laboratory of Crop Stress Biology in Arid Areas, Northwest AF University, Yangling, Shaanxi 712100, PR China2Institute of Soil and Water Conservation, Chinese Academy of Science and Ministry of Water Resources, Yangling, Shaanxi 712100, PR China摘要：从黄土高原子午岭地区的草原土壤中分离到一种新的链霉菌F22T，该菌具有典型的链霉菌属形态和化学特征。基于16S rRNA的系统发育分析表明F22T菌属于链霉菌属，与该属的抗霉素链霉菌（Streptomyces resistomycificus ）NBRC 12814T有98.28%的序列相似，与高加索山链霉菌（Streptomyces ciscaucasicus ）NBRC 12872T有98.14%的序列相似，与教酒链霉菌（Streptomyces chartreusis ）NBRC 12753T有98.14%的序列相似，与暗灰链霉菌（Streptomyces canus ）NRRL B-1989T有98.14%的序列相似。通过DNA杂交及形态和表型的分析，F22T与这些相似的链霉菌属菌株有显著区别。F22T分泌的物质对细菌和真菌具有抗性，尤其是对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和锈腐菌具有明显的拮抗作用。所以基于DNA—DNA同源性分析、形态、表型和系统发育的分析，F22T应该是链霉菌属的一个新种，命名为Streptomyces ziwulingensis sp.nov，代表菌株为F22T(=CCNWFX 0001T=JCM 18081T=ACCC41875T)。1943年Waksman和Henrici首次提出了链霉菌属。放线菌具有分支的基内菌丝和气生菌丝，细胞壁具有LL—二氨基庚二酸而没有特性糖(wall chemotype I; Lechevalier Lechevalier, 1970)且DNA的G+C含量很高(Anderson Wellington, 2001; Manfio, 1995)。在22500种具有生物活性和毒性的天然产品中，大约45%从放线菌中获得(Be′rdy, 2005)。通过对中国不同地区土壤的放线菌多样性分析，从黄土高原的子午岭草原土壤中分离到一种抑制特定微生物的新的放线菌。根据以下多种分类方法认定为F22T。F22T通过改良的PH7.2的高氏1号培养基分离得到。该培养基配方为20.0 g可溶性淀粉，1.0 g KNO3，0.5g K2HPO4.3H2O，0.5g MgSO4.7H2O，0.001g FeSO4.7H2O，0.5g NaCl，20g琼脂和0.5mg维生素B。维生素B混合物包含0.5mg烟碱酸、0.5mg维生素B6、0.5mg核黄素、0.5mg纤维糖和0.25mg生物素。该菌保存在—80℃，20%的甘油悬浮液中。我们分别用光学显微镜(CX31; Olympus)和电子显微镜(6360LV; JSM)对在高氏一号培养基上培养了7天和14天的该菌进行细胞形态学观察。电子显微拍照遵循Eguchi 等人(1993)的方法。形态特征检测（在不同培养基上，28℃恒温培养14天的F22T）遵循国际链霉菌项目(ISP; Shirling Gottlieb, 1966)的方法。颜色检测按照Kelly (1964)描述的方法进行。在20、28、37和45℃，pH4.0—12.0（每隔一个pH检测一次），0–5%的NaCl（每隔1%检测一次）的不同条件下，我们将F22T分别在贝奈特琼脂培养基上恒温培养14天来进行碳源和氮源及其他特征的检测。对于碳源和氮源的利用情况，用Gordon Mihm (1962) and Tsukamura (1966)的方法来检测。其他的表型特征按照标准方法(Goodfellow, 1971; Williams 等人,1983) 检测。在28℃，200 r.p.m,的恒温摇床上，我们用高氏合成液体培养基培养F22T菌以进行化学分类研究。菌丝用蒸馏水分别洗涤离心三次并冷冻干燥。我们用Lechevalier Lechevalier (1980)的方法——TLC分析LL—二氨基庚二酸的同分