MK基因对小鼠子宫基质细胞蜕膜化进程的影响.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 201 1, 38(8): 730~736 MK 因对小鼠子宫 质细胞蜕膜化进程的影响* 杨根岭 罗文萍 刘真真 谭冬梅 王应雄 谭 毅** (重庆医科大学实验动物中心，重庆4000 16) 摘要 为探索肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand ，TRAIL) 的死亡受体(mouse killer，MK)对 小鼠子宫基质细胞蜕膜化进程的影响，构建MK 基因过表达和siRNA 干扰重组腺病毒 原代培养的小鼠子宫基质细胞感染 MK 过表达或者干扰 组腺病毒并诱导蜕膜化，72 h 后用免疫细胞化学与流式细胞术分别检测蜕膜细胞的标志物催乳素 (prolactin ，PRL)与蜕膜细胞凋亡率的变化情况 妊娠d4 小鼠子宫角注射MK 重组腺病毒，观察 胎植入点的数量变化 实 验结果表明，与对照组相比，在诱导的蜕膜细胞中过表达MK 使得催乳素的含量显著降低(P 0.05)，同时，蜕膜细胞的凋亡 率明显升高(P 0.05)，而siRNA 干扰之后催乳素的含量显著升高，凋亡率明显下降(P 0.05)，但是，宫角注射MK 基因过 表达和siRNA 干扰 组腺病毒之后， 胎植入数量均显著减少(P 0.0 1) 提示MK 基因通过参与小鼠子宫内膜基质细胞的 蜕膜化进程，调节蜕膜细胞增殖与凋亡之间的平衡从而影响胚胎的植入 关键词 死亡受体MK ，蜕膜化， 胎植入 学科分类号 Q492 DOI: 10.3724/SP.J.1206.20 11.00022 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related 因重组腺病毒，进一步观察 MK 对胚胎植入的 apoptosis inducing ligand ，TRAIL)是TNF 家族成员 影响 之一，通过线粒体和细胞膜上死亡受体两种途径诱 1 材料和方法 导肿瘤细胞凋亡，但对正常组织细胞的生长不产生 影响，因此，近年来TRAIL 被认为是一种极具潜 1.1 材料 [1] 清洁级 NIH 小鼠，6 ～8 周( 合格证号为 力且安全的 肿瘤因子 在人类已发现有 5 种 TRAIL 受体：DR4 、DR5、DcR1、DcR2 和 OPG 【SCXK(渝)2007-0001】) ，雌雄鼠按2 ∶1 自然合笼， (osteoprotegerin) ，其中DR4 、DR5 为死亡受体， 次晨发现阴栓者记为妊娠d1 孕鼠 含胞内死亡结构域(death domain，DD) 和依赖 pAdTrack-TO4 (GFP)、pAdEasy-1 腺病毒载体 Caspase 途径凋亡信号的识别结构[2] 在小鼠， 质粒由重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部 TRAIL 的死亡受体(mouse killer，MK) 与人类的 点实验室唐霓研究员赠送 干扰表达重组MK DR5 是同系物，是唯一可诱导肿瘤细胞凋亡的 腺病毒AdEasy-SES-HUS-MKsiRNA(RFP) 由本课题 TRAIL 受体 组制备[3] Trizol、限制性内切酶、T4 连接酶， 蜕膜细胞具有类似肿瘤细胞大核多核的特点， MKsiRNA 和 -actin 引物购自Takara 公司；质粒提 鉴于胚胎植入与肿瘤侵袭有诸多相似性，本课题组 取试剂盒购自Promega 公司；DMEM/F12 无酚红培 在前期工作中发现MK 在小鼠胚胎植入后的子宫 养基、LipofectamineTM 2000 Reagent 转染试剂盒、 蜕膜细胞中表达，推测MK 可能在小鼠子宫蜕膜 化及胚胎植入过程中具有促进蜕膜细胞凋亡的作 用 据此，我们利用MK 基因过表达和siRNA 干 * 国家 自然科学基金 和重庆市 自然科学基 金