含T细胞表位的猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及其在小鼠中的免疫原性分析.pdf

第 35卷 第 3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．35．NO．3 2013年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2013 doi：10．39698，issn．1008—0589．2013．03．13 含T细胞表位的猪~．mdx病毒VP2基因核酸疫苗的构建 及其在小鼠中的免疫原性分析 孙彦欣，左玉柱，李建辉 ，范京惠 ，裴丽华，杨 震，王晨枫 (河北农业大学 动物科技学院，河北 保定 071001) 摘 要：为研制猪细小病毒(PPV)i要保护性抗原VP2基因核酸疫苗，本研究将猪圆环病毒(Pcv)编码T细 胞表位 P21多肽的序列连接于PPVVP2基因的5’端克隆于pcDNA3．1(+)中，构建重组表达质粒 pcDNA．P21一VP2， 并将其经磷酸钙介导转染HEK293T细胞中检测其表达情况。SDS．PAGE和westemblot检测表明，P21一VP2重组 蛋白获得了有效的表达，其分子量约为67ku。将 pcDNA．P21．VP2肌 肉注射BALB／c小鼠后，采用ELISA方法检 测其抗体，并采用MTT法检测小鼠免疫后脾脏淋 巴细胞的增殖活性。试验结果表 明，重组质粒能够有效诱导小 鼠产生明显的抗体反应，并且对淋巴细胞的增殖反应有明显促进作用。该实验结果为研制有效的PPV核酸疫苗 奠定 了基础。 关键词：猪细小病毒VP2基因；猪圆环病毒P21表位序列；核酸疫苗 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2013)03．0222．05 Constructionandimmunogenicityofnucleicacidvaccineexpressing porcineparvovirusVP2fusedwithporcinecircovirusTcellepitope SUN Yan-xin，ZUO Yu—zhu，LIJian—hui，FAN Jing—hui，PEILi-hua，YANG Zhen，WANG Chen—feng (CollegeofAnimalScienceandTechnology，HebeiAgriculturalUniversity，Baoding071001，China) Abstract：ToinvestigatetheDNA vaccineagainstporcineparvovirus(PPV)，chehelperT-cellepitope(P21)encoding sequencewasfusedon5endofPPV VP2geneandclonedintopcDNA3．1(+)toconstructtherecombinantplasmidof pcDNA—P21一VP2．TheexpressionoftherecombinantproteinP21一VP2 wasverifiedin pcDNA—P21一VP2transfectedHEK293T cellsbywestern blot．Inaddition，micewereimmunizedbyintramuscularinjectionofpcDNA—P21一VP2atdosageof10 gthree timesat2-weekintervalsandtheresultsshowedthattheantibodytiterwasthesameinmiceinducedbypcDNA．P21．VP2asthe PPV inactivatedvaccinedetectedbyELISA．Furthermore，theMTT assayindicatedthatthespleen lymphocyteproliferationwas significantly higher in recombinant plasmid group than thatof controlrgoup．In conclusion，0111data demonsrtated the p