化学去细胞异种神经复合NGF修复神经缺损的早期神经电生理研究.docVIP

精品论文 参考文献 化学去细胞异种神经复合NGF修复神经缺损的早期神经电生理研究 郝增涛 温树正 　　（内蒙古医科大学第二附属医院手外二科 内蒙古呼和浩特 010030） 　　【摘要】目的：通过化学萃取方法处理兔胫神经，并移植于wistar大鼠坐骨神经缺损处，观察大鼠早期神经电生理恢复情况。方法：选取成年日本大耳白兔5只作为神经供体，切取双侧胫神经各3cm，经化学方法制成去细胞神经基膜管，其中15段用4500U/ml的NGF溶液4℃浸泡24小时；另15段置于无菌PBS缓冲液中4℃保存备用；选取witar大鼠45只，根据移植物的不同，将 Wistar 大鼠随机分为3组，每组15只：实验组（A组）：去细胞异种神经基膜管复合NGF移植组、对照组Ⅰ（B组）：去细胞异种神经基膜管移植组、对照组Ⅱ（C组）：自体神经移植组。分笼喂养，术后1个月行神经电生理检测，包括胫后肌群运动诱发电位，再生神经的传导速度。结果：刺激移植段近侧神经，均在大鼠胫后肌群记录到运动诱发电位，神经传导速度为平均为A组21.16plusmn;2.31m/s，B组为13.37plusmn;1.89m/s，C组为21.43plusmn;2.18m/s，A组与C组比较无统计学意义（P＞0.05）,A组与B组比较差异有显著性（P＜0.05），说明神经恢复效果优于B组。结论：化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损，术后1个月，复合NGF 的去细胞神经基膜管运动传导功能恢复优于单纯去细胞神经基膜管，效果更加接近于自体神经移植。 　　【关键词】鼠坐骨神经；NGF；异种神经移植；神经电生理 　　【中图分类号】R741 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）16-0128-03 　　选取理想的神经移植替代物，成功修复周围神经缺损已是目前临床的研究热点，目前研究表明：同种异体的去细胞神经基膜管可以为大鼠坐骨神经再生提供一个良好的再生通道，而本实验研究采用异种神经基膜管复合NGF桥接周围神经缺损，早期观察大鼠坐骨神经再生的神经电生理恢复情况，取得了满意结果。 　　1.材料与方法 　　1.1 去细胞异种神经基膜管的制备 　　5％盐酸氯胺酮（0.25g/kg）耳缘静脉注射麻醉，取兔小腿后内侧入路显露胫神经，剪取直径约1.5mm的胫神经4cm，按下述方法进行处理[1]：（1）蒸馏水浸浴7小时，换水2次；（2）震荡器中（150转/分）30%TritonX-100溶液消化12小时；（3）蒸馏水浸浴1小时；（4）震荡器中（150转/分）4.0%脱氧胆酸钠溶液消化24小时，重复以上步骤1次，蒸馏水清洗后将处理好的神经放于无菌PBS缓冲液（PH7.2）中，5.4℃冰箱内保存备用。 　　1.2NGF（鼠神经生长因子）与去细胞神经基膜管的复合 　　将制备好的去细胞神经基膜管随机选15段，每段1cm长，放置在由武汉海特生物制药有限公司提供的注射用鼠神经生长因子（4500U/ml）溶液中，4℃下浸泡24～48小时。[2] 　　1.3神经移植过程 　　用5%盐酸氯胺酮（0.1g/kg）腹腔注射，麻醉剂量约0.7ml。大鼠取俯卧位剪去右侧臀部鼠毛，5%碘酒消毒、75%酒精脱碘后，作大鼠右侧臀部至大腿的后外侧弧形切口长约2cm，在放大10倍的手术显微镜下切开皮肤，从臀部肌间隙暴露右侧坐骨神经，在距坐骨神经起始部1cm以远处切断长约10mm，分别行实验组去细胞异种神经基膜管复合NGF移植（A）、对照组I去细胞异种神经基膜管移植（B）、对照组II自体神经移植（C），用11-0显微缝线4针等间距缝合神经外膜，逐层缝合臀部肌肉、皮肤，术后每组动物分笼喂养，术后1个月时行神经电生理观察。 　　1.4胫后肌群运动诱发电位及神经传导速度检测 　　采用丹麦Danec Neuromatic 2000C肌电图仪测量大鼠胫骨后肌群运动诱发电位。方法：动物处死前用5%盐酸氯胺酮（0.1g/kg）腹腔注射，麻醉剂量约0.7ml。暴露移植段神经及胫骨后肌群，以及对侧正常坐骨神经，刺激电极置于移植段近侧约2mm处，记录电极置于胫骨后肌群深约4mm，刺激参数为0.8～1.5mA、0.1ms、1.0Hz。地线夹在足底部，每只动物刺激两次，待屏幕显示图形稳定后保存记录，同样刺激对侧正常坐骨神经，并保存记录。将三组最后所得的潜伏期时限与两刺激电极之间的距离进行计算得出神经传导速度，进行统计学分析。如图1.2.3所示。 　　 　　 　　3.讨论 　　周围神经再生过程中首先是雪旺氏细胞附着在基底膜上，以形成Buengner氏细胞带，近端再生轴突通过Buengner氏细胞带延伸到终末器官，恢复其功能。而神经缺损修复的关键点就是提供合适的神经支架供雪旺氏细胞