微生物工程实验报告.doc

中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告 实验一? 培养基的配制和灭菌 一、目的要求 1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2.了解几种灭菌方法，掌握压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3. 二、实验材料 1、药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、1N HCl、1N NaOH。 2、设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。 3、材料：天平、药匙、电炉、pH试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、牛皮纸、线绳、标签等。 移液器（1mL 0.2mL）。 三、实验内容 (一) 培养基的配制 1、培养基的配制方法和步骤 1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。 2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 3)调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。 5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。 6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。 7)灭菌：在高压锅中， 115 (C高温灭菌30min。 2 A. 富集培养基（液体）： 海水2216E液体培养基（g/L）：蛋白胨 5.0，酵母粉 .0，海水1L，pH 8.0。 取50mL分装250mL三角瓶后，8层纱布封口，外包1层牛皮纸， 121 (C高温灭菌min。 B. 2216E斜面（固体）： 海水2216E液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内加入3mL，121 (C高温灭菌0min，灭菌后摆斜面。2支/小组，共65组，130支。（15×150规格，带试管帽）300 mL。 C. 无菌生理盐水和保种液： 生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121(C高温灭菌0min。 保种液：生理盐水，加25%甘油。 D. 碳源优化培养基： 以海水2216E液体培养基（蛋白胨 0.5%，酵母粉 (二) 分离培养微生物常用器皿的准备 1、清洗一些玻璃仪仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿等。 2、制作8层纱布（108个），酒精棉（2瓶）。 3、Tip头（0.2，1ml，分装枪头盒，牛皮纸包好，灭菌）； 保种管（6支/包，共12包） 药勺（1把/包，共12包，包好，灭菌） 长竹签（6支/包，共12包，包好，灭菌） 4、卫生 （308实验室 超净台，实验台面） (三) 培养基和玻璃器皿的灭菌方法 1、加压蒸汽灭菌法。其步骤如下： 1)灭菌锅内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。 2)接通电源，进行加热。 3)排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出冷空气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到将近零时，再关闭排气阀。 4)当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时,此时灭菌锅内的温度为121℃,维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。 5)灭菌时间一到，切断电源。待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌锅盖，取出物品。 2、紫外线灭菌 一般使用30W灯管，9m3空间，距地面2m，打开紫外灯照射0.5h，可使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此上适用于空气表面杀菌。 3、化学药剂消毒灭菌 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有酒精、甲醛、高锰酸钾、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、来苏尔、过氧乙酸等，它们有的是杀菌剂，有的是抑制剂。 四、思考题 1、固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？ 答：固体培养基加琼脂后加热溶化时应该注意一下问题： 在加热融化时要注意温度。因为琼脂是由从石花菜中提取的胶体多糖制成，它在98℃水中能溶解，温度降至45℃时就凝成固体。所以温度太低时会使琼脂凝成固体，太高又会使其糊化； 受热要均匀，可以垫上石棉网，要用玻璃棒不停缓慢搅拌加热完毕后，在合适的温度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培养基中加琼脂的作用是什么？ 答：琼脂性质稳定，不能被大部分微生物水解利用。它是一种高分子的碳水化合物，从红藻等海藻中提取，仅溶解于热水，成为溶胶，冷后（40℃以下）即凝固为固体状成凝胶。 培养基中加琼脂的作用是： 用作凝固剂。琼脂是多糖类物质，性质较稳定，一般稳定后不易分解，所以一般用作凝固剂而不引起化学成分的变化； 具有支持作用。琼脂冷却后是固体，可用于配置所需的固体培养基，作用类似于支架。 用琼脂配制的固体培养基，可用以进行高温培养而不熔化，在凝固之前接种时，也不致将培养物烫死。3、如何检