微生物生化和血清学试验标准操作规程.doc

触酶试验标准操作规程 目的 规范触酶试验标准操作规程。 2．原理 具有触酶(过氧化氢酶)的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现 气泡。 3．试剂 3％过氧化氢溶液。 4．质控 金黄色葡萄球菌ATCC 25923阳性，肺炎链球菌ATCC 4961 9阴性。 5．操作步骤 取3％过氧化氢溶液0．5 ml，滴加于不含血液的细菌琼脂培养物上，或取1～3 ml滴加入盐水菌悬液中。 6．结果判断 培养物出现气泡者为阳性。 7．注意事项 7．1细菌要求新鲜。 7．2不宜用血琼脂平板上的菌落作触酶试验，因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。 7．3需用已知阳性菌和阴性菌作对照。 8．临床意义 在革兰阳性球菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌及微球菌均阳性，因此可用于革兰阳性 球菌的初步分群。 氧化酶试验标准操作规程 1．目的 l 规范氧化酶试验标准操作规程。 { 原理 氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。 3 . 试剂 盐酸二甲基对苯二胺(或四甲基对苯二胺)0.1g，加蒸锱水10ml，置于棕色瓶内可用一周。冰箱保存，或分装于棕色瓶内密封。 4. 质控 铜绿假单胞菌ATCC27853阳性，大肠埃希菌ATcc 25922阴性。 操作步骤 去洁净的滤纸一小块， 蘸取菌苔少许，加1滴10g／L盐酸二甲基对苯二胺溶液于菌落上，观察颜色变化。 6．结果判断 立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。 7. 注意事项 7．1 试剂在空气中易氧化，故应经常更换新试剂，或配置时试剂内加入0．1％维生素c以减少自身氧化。 7. 2 不宜采用含葡萄糖培养基上的菌落(葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性)。 7．3实验时应避开含铁的培养基等含铁物质，因本实验过程中，遇铁时会出现假阳性。 8 . 临床意义 8. 1 用于奈瑟菌属﹑非发酵等细菌的鉴定。 如果肠杆菌科不进行本试验，则可能将氧化 8．2所有的革兰阴性菌均应进行氧化酶试验，如果肠杆菌科不进行本试验，则可能将氧化酶阳性的嗜水气单胞菌错误地鉴定为大肠埃希杆菌或沙雷菌。 凝固酶试验标准操作规程 1．目的 规范凝固酶试验标准操作规程。 2．原理 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝血酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固。 3．试剂 新鲜人或兔血浆，生理盐水。 4．质控 金黄色葡萄球菌ATCC 25923阳性，表皮葡萄球菌ATCC 57625阴性。 5．操作步骤 5．1 玻片法取兔或混合人血浆和盐水各1滴分别置清洁载玻片上，挑取待检菌菌落分别与血浆及盐水混合。如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。 5．2试管法取试管2支，分别加入0．5 ml的血浆(经生理盐水1：4稀释)，挑取菌落数个加入测定管充分研磨混匀，用已知阳性菌株加入对照管，37℃水浴3～4小时。血浆凝固为阳性。 6．结果判断 玻片法：如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。试管法：血浆凝固为阳性。 7．注意事项 若被检菌为陈旧的肉汤培养物(18～24小时)或生长不良、凝固酶活性低的菌株往往出现假阴性。 8．临床意义 金黄色葡萄球菌凝固酶试验为阳性，而表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌凝固酶试验为阴性，故此试验对鉴别葡萄球菌有重要价值。 DNA酶试验标准操作规程 1．目的 规范DNA酶试验标准操作规程。 2．原理 某些细菌可产生细胞外DNA酶。DNA酶可水解DNA长链，形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链。长链DNA可被酸沉淀，而水解后形成的寡核苷酸则可溶于酸，当在菌落平板上加入酸后，若在菌落周围出现透明环，表示该菌具有DNA酶。 - 3．试剂 3．1 DNA琼脂成分 DNA(脱氧核糖核酸) 2．0 g 胰蛋白胨 15 g 大豆胨 5．0 g 氯化钠 5．0 g 琼脂 20g 蒸馏水 1 000 ml pH 7．2～7．4 3．2制备将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解，校正pH，分装三角烧瓶，经1 15C灭菌l5分钟，倾注于灭菌平皿，冷藏备