GB/T 5413.2-1997婴幼儿配方食品和乳粉　乳清蛋白的测定.pdf

GB/T5413.2-1997 自ii 言 本标准参考了日本森永公司的乳清蛋自测定方法。 本系列标准从实施之日起，代什GB5413-85} 本标准山中国轻_卜总会提出。 本标准山全国乳.甘.标准化中心归日。 本标准负责起草单位:哈尔滨森水乳，}}。有限公司、国家乳制.甘.质量监督检验中心。 本标准参加起草单位:PL部食,.U.IV生监督检验所、浙江省轻 「业研究所、雀巢(中国)投资服务有 限公司。 本标准卞要起草人:」几丽坤、张燕杰、赵勤。 中华 人 民共 和 国 国家标 准 婴 幼 儿 配 方 食 品和 乳 粉 GB/T5413.2-1997 乳 清 蛋 白的测 定 代并GB5413-85 MilkpovAerandformulafoodsforinfantandyoungchildren -Determinationofwheyprotein 范围 本标准规定了酪蛋自J‘乳清蛋白含量比率的测定方法。 本标准适用」几婴幼儿配方食.1it1.和乳粉中酪蛋白与乳清蛋自含量比率的测定。 方法提要 试样用SDS-聚苯烯酸胺凝胶电泳(SDS,Laemmli法)后，用光密度计对按分子量顺序分离 开的酪蛋白J‘乳清蛋自各谱带进行测定，求得酪蛋白与乳清蛋自的含量比率。 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 3.1 电泳缓冲液:将Tris(hydroxymethyl)aminomethane7.5g、甘胺酸36g,SDS2.5g溶J,-A馏水中，定 容至500ML。使用前以蒸馏水稀释5倍后使用。 3.2 SDS试样缓冲液:0.125mol/LTrsi一盐酸(pH6.8)，体积分数20%的甘油，4Yo(m/V)SDS，体积分 数IOyo2-mercaptoethanol，质量分数0.0025%的浪酚蓝(bromophnolblue). 3.3 染色剂:质量分数0.I%考马斯蔽R-250(CoomassicbrilliantblueR-250)，体积分数10%的甲醉， 体积分数7.5%的乙酸. 3.4 脱色剂:体积分数10%的甲醉，体积分数7.5%的乙酸。 3.5 酪蛋白。 3.6 精制乳清蛋II(WPC). 3.7 SDS:用梯度凝胶(10%-20%)或同效凝胶。 仪器 常用实验室仪器及: 4.1 平板式电泳槽。 4.2 供电设备。 4.3 光密度计。 操作步骤 5.1 样液的制备 将试剂按蛋白质10-2印9爪L的浓度范围溶解在蒸馏水中。加入与试样同体积的SDS试样缓冲 国家技术监督局 1997-05-28批准 1998-09-01实施 GB/T5413.2-1997 液，在煮沸热水中静置5min后，作为试样液。 5.2 标准溶液的制条 使用前，酪蛋白和乳清蛋白的蛋自质浓度按凯氏((Kjeldahl)法精确测定。将酪蛋自和乳清蛋白按上 述方法分别进行溶解和处理后作为标准溶液。此外，还可将酪蛋自与乳清蛋白的标准溶液按蛋白质含量 的任意比率(比如蛋自质的浓度比为75:25,50:50,25:75)进行混合作为混合标准溶液。 53 电泳 将凝胶设置在电泳槽中，加入电泳缓冲液。试样溶液与标准溶液的添加量为侮孔I印L.电泳时间因 电泳凝胶的种类不同而异.以lO%-20%的梯度复合凝胶进行电泳时，定电流为40niA，时间为60min. 电泳结束时间可按浪酚蓝的蓝谱带到达离凝胶下端5mm时为标志。电泳结束后将凝胶放入染色液中 振荡染色Ih,然后转入脱色液中振荡脱色12h再移到蒸馏水中。 5.4 测定 以光密度计对带色的各谱带进行测定，求得其颜色N度(OD)的积分值(=Trace值)。 分析结果的表述 6.1 谱带的测定 电泳后的谱带中，参照分子量以及标准酪蛋白’j乳清蛋自的电泳图，分别选择以下谱带进行计算。 (1)西齐蛋白:GL3-酪蛋白(分子量23500),f3