TLC_薄层色谱 2.doc

薄层色谱（TLC法） 一、实验目的和基本要求 ??? 薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固-液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。 ?? ?通过实验让学生 ?? （1）初步掌握簿层色谱法的实验技术。 ?? （2）学会用薄层色谱法来跟踪有机反应。 二、基本原理 ? 这是利用吸附剂（硅胶、氧化铝等）对不同组分吸附能力的差异从而达到分离目的的方法。 三、操作要点和说明 ?? 薄层色谱法的整个过程包括以下步骤： ?? 1、薄层板的制备 制薄层板的主要原料是吸附剂和粘结剂 吸附剂：最常用于 TLC的吸附剂为硅胶 GF254； 硅胶HF254。 粘结剂：一般用所羧甲基纤维素钠（CMC），也有用淀粉的。CMC 为粉状固体，用时先加水，水浴上熬成糊状，配成1％水溶液。 制板：（1）小板的制备：将硅胶加 1％ CMC，调成桨状（在平铺玻璃板上能晃动但不能流动），将其涂在载玻片上（ 75 X 25），为使其坦平，可将载玻片用手端平晃动，致坦平为止，放在干净平坦的台面上，晾干之后放入110℃烘箱活化1小时即可使用（一次可做很多块）。?（2）大板的制备：略 ?? 2、点样 点样用的毛细管为内径＜ lmm的管口平整的毛细管，将样品溶于低沸点的溶剂（乙醚、丙酮、乙醇、四氢呋喃等）配成1％溶液。 ?? ?点样前，可先用铅笔在小板上距一端5mm处轻轻划一横线，作为起始线，然后用毛细管吸取样品在起始线上小心点样，如需重复点样，则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。若在同一块板上点几个样，样品点间距离为5mm以上。 ?? 3、展开 展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。薄层的展开在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放入色谱器中（小板可用广口瓶代替），使色谱器内空气饱和5－10min，再将点好试样的薄层板放入色谱器中进行展开，点样的位置必须在展开剂液面之上，当展开剂上升到薄层的前沿（离前端 5－10mm）或多组分已明显分开时，取出薄层板放平晾干，用铅笔划溶剂前沿的位置后，即可显色。 ?? 4、显色 如果化合物本身有颜色，就可直接观察它的斑点。如果本身无色，可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点（有苯环的物质都有），用铅笔在薄层板上划出斑点的位置；对于在紫外灯光下不显色的，可放在含少量碘蒸气的容器中显色来检查色点（因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点），显色后，立即用铅笔标出斑点的位置。 ?? 5、用 TLC跟踪有机反应 在同一块板上点上原料样和反应混合物样（均需配成稀溶液），按上述方法进行展开和显色，记下原料样的斑点位置和反应混合物样中相应斑点的位置和大小。过一定时间后，再取反应混合物样液点样、展开、显色，如发现反应混合液样中相应于原料斑点的位置处，无斑点或斑点变小，则说明反应已经完成或接近完成，所以依此可跟踪有机化学反应。这在有机合成上很有意义。四、思考题 ? 1、在一定的操作条件下为什么可利用Rf值来鉴定化合物？ 答：薄层色谱是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。因为色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同或其它亲和作用性能的差异，使混合物溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分离。所以可利用Rf值来鉴定化合物。化合物不同，其Rf值是不同的。 ? 2、在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？ 答：薄层色谱展开剂的选择和柱色谱一样，主要根据样品的极性，溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。凡溶剂的极性越大，则对化合物的洗脱力也越大，也就是说Rf值也越大，（如果样品在溶剂中有一定溶解度）。因为根据溶剂的极性，化合物的极性及Rf值，可知各组分在薄层板上的位置。 ? 3、展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？ 答：这样所点试样将被溶剂所洗脱，薄层色谱无法展开。