2010版药典无菌检查法-钱维清.ppt

（一）总则部分 新增规定 1、“ 防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。” 2、“ 日常检验还需要对环境进行监控。” 3、“ 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 （二）培养基部分 1、删除： 硫乙醇酸盐流体培养基 后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明 2、删除： 改良马丁培养基 后括号（用于培养真菌）的说明 3、删除： 选择性培养基 项下加入适量中和剂或表面活性剂 “ 如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）”等说明。 修订为： 在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。 增订：表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法 (见微生物限度检查法中） 4、将原排列第 6. 的 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查） 修订排列为第 4. ——按顺序归类培养基1.～4. 均为直接用于无菌检查的液体培养基。 （三）培养基灵敏度检查部分 1、在菌液制备中，修订黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。 删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 吸出孢子悬液的操作方法 2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限： 菌液制备后“若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内使用。” （四） 稀释液、冲洗液及其制备方法部分 在原有 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲 新增加： 可根据供试品的特性，选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 （五）方法验证试验部分 1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除铜绿假单胞菌，增订大肠埃希菌。 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。 （六）供试品的无菌检查部分 1、阳性对照用量的修订： 原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。” 修订为 ：若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。 ——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按验证的方法确定。 2、薄膜过滤法中的增、修订： 2.1 新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜 2.2 新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml 2.3 新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验 （七）结果判断部分 新增订：阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。 ——强调阳性对照、阴性对照在无菌检查实验成立与否中的作用。 （八） 表1、表2和表3部分 表1 将表1第3列的表题原 “每种培养基最少检验数量” 修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量” ——更明确指出接种到培养基中去的检验量。 修订了表1下的 注: 对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。 表2 将表2原名称：“上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量” 修订为：“ 液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” ——明确液体制剂最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验数量见表2的第3列。 · 修订了表2下的 注: ——对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。 表3 ·将表3原名称：“上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量” 修订为：“ 固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” ——明确固体制剂最少检验量见表3第2列；供试品最少检验数量见表3的第3列。 ·修订了表3下的 注: ——对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。 一、无菌检查用培养基的不断改进 1、应与国际先进药典无菌检查法所用培养基保持一致 理由（1） 与USP/BP/EP/JP保持一致便于国际交流。 二、增加对检出菌的检定要求 理由（1） 面临更高的要求。 随着现代科技的发展和国际交往的频繁，人们对物质文化生活及健康保障的要求越来越高，医药