模拟微重力条件下对wb-f344肝干细胞表征分子表达的影响.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１０）：１７～２１ 模拟微重力条件下对ＷＢＦ３４４肝干细胞表征 分子表达的影响 １，２ ２ ３ 曲鑫建 　丰美福 　孙世铎 （１右江民族医学院　百色　５３３０００　２中国科学院动物研究所生物膜与膜生物国家重点工程实验室　北京　１０００８０） （３西北农林科技大学动物科技学院　杨凌　７１２１００） 摘要　研究大鼠ＷＢＦ３４４肝干细胞在旋转式细胞培养系统（ＲＣＣＳ）中培养进行细胞大规模扩增 并保持干细胞的特性的可能性，为干细胞治疗疾病及肝组织工程提供理想的细胞来源。以ＷＢ Ｆ３４４肝干细胞在ＲＣＣＳ中培养，以平面单层培养为对照，在培养后不同时间分别进行形态观察、 流式细胞仪测细胞周期、逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测肝干细胞特异性基因甲胎蛋白 （ＡＦＰ）和白蛋白（ＡＬＢ）的表达，免疫荧光染色检测 ＡＦＰ、ＡＬＢ蛋白的表达。结果表明，ＲＣＣＳ培养 的ＷＢＦ３４４细胞粘附在Ｃｙｔｏｄｅｘ３微载体上状态生长良好，细胞增殖较平面培养有明显增加；ＲＴ ＰＣＲ和免疫荧光染色检测结果一致：模拟微重力培养组ＡＦＰ的ｍＲＮＡ表达强度及ＡＦＰ阳性细胞 均显著高于平面培养组，而ＡＬＢｍＲＮＡ表达强度和ＡＬＢ阳性细胞均低于对照组。说明模拟微重 力培养条件下，能较好地维持肝干细胞特性，进一步证明这种培养体系是一种理想的肝干细胞培 养模式。 关键词　模拟微重力条件　ＷＢＦ３４４肝干细胞　ＲＣＣＳ 中图分类号　Ｑ８１３．１ 　　肝干细胞移植与原位肝移植相比，有操作简单、费 化功能的分子机制［３，４］。 用低廉、风险小、免疫源性低、耐受低温储存等优点，并 　　应用生物反应器系统进行微载体细胞大规模扩增 ［１］ 且可供给多个受体，大大缓解了供肝短缺的矛盾 。 能对各种细胞进行高密度培养，培养的细胞／组织更接 肝干细胞移植（ＨＳＣＴ）不仅可以作为原位肝移植手术 ［５］ 近生物体内三维结构，是一种理想的体外培养系统 。 的一种代替疗法，在逆转急性肝功能衰竭及治疗代谢 近年来，我国学者使用水平式旋转生物反应器ＲＣＣＳ进 缺陷性肝病等方面也显示了巨大的潜力。人胎肝中富 行了多种细胞的培养研究，但应用ＲＣＣＳ培养肝干细胞 含肝干细胞，在肝干细胞移植领域显示了广阔的应用 尚属首次。因此，本实验在模拟微重力条件下 培养大 ［２］ ８ 前景 。但是，进行一次 ＨＳＣＴ治疗，需要 １×１０ ～１ 鼠ＷＢＦ３４４细胞，检测细胞形态、增殖及肝干细胞的标 ９ ×１０数量的细胞，来自于人胎肝的干细胞数量远远不 记分子ＡＦＰ和ＡＬＢ的表达，确定其干细胞特性是否发 能满足科研和临床应用。因此，体外大规模扩增肝干 生改变，为探讨建立肝干细胞大规模扩增培养模型的 细胞便成为干细胞研究中一个亟待解决的课题；同时， 可行性进一步提供实验依据。 体外培养通常会导致细胞去分化，培养的细胞不仅失 去了正常的形态，而且失去了其生化表型与功能性质， １　材料和方法 而特异性功能基因的表达是细胞表现其生化表型与分 １．１　材　料 　　ＷＢ