人Th17细胞体外诱导分化条件的研究-中国药科大学学报.PDFVIP

学 报 １０６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１６，４７（１）：１０６－１１１ 人Ｔｈ１７细胞体外诱导分化条件的研究 王　辰，郭　薇，王　欣，郁冬梅，王宇恒，姚文兵 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） 摘　要　通过密度梯度离心法从人新鲜血液中分离获得人外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ），比较分析加入不同细胞极化因子 （ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＧＦ和ＩＬ２３）以及诱导不同时间（１，２，３，４ｄ）对Ｔｈ１７细胞分化的影响，利用流式细胞仪、ＥＬＩＳＡ方法以及 β β ＱＰＣＲ技术考察相关指标，评估人体外Ｔｈ１７细胞的分化水平。研究表明，ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＧＦ和ＩＬ２３单独均能对Ｔｈ１７细 β β 胞的分化起到促进作用，联用ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＧＦ和ＩＬ２３时可使Ｔｈ１７细胞体外分化效率达到最佳。随着诱导时间的延长， β β Ｔｈ１７细胞分化水平逐渐升高，培养３ｄ时达到峰值，继续增加培养时间分化率反而出现降低。最终确立人Ｔｈ１７细胞体外 分化的最佳诱导条件：在加入ＣＤ３抗体和ＣＤ２８抗体的基础上，同时加入ＩＬ１、ＩＬ６、ＴＧＦ以及ＩＬ２３共同培养人ＰＢＭＣｓ β β ３ｄ可有效地刺激人Ｔｈ１７细胞的分化，并且流式细胞检测Ｔｈ１７细胞分化率达到近１０％，ＥＬＩＳＡ检测细胞上清液中ＩＬ１７Ａ 含量达到近３ｎｇ／ｍＬ，ＱＰＣＲ方法分析ＩＬ１７ｍＲＮＡ基因表达升高达１５倍，此方案具有操作简便、周期短、成本低廉等优点， 为Ｔｈ１７细胞的功能研究及相关疾病治疗药物的研发建立了有效的检测平台。 关键词　人外周血单核细胞；Ｔｈ１７细胞；体外；诱导分化 中图分类号　Ｒ３９２；Ｑ２５４　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１６）０１－０１０６－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　王辰，郭薇，王欣，等．人Ｔｈ１７细胞体外诱导分化条件的研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１６，４７（１）：１０６－１１１ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＷＡＮＧＣｈｅｎ，ＧＵＯＷｅｉ，ＷＡＮＧＸｉｎ，ｅｔａｌ．ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＴｈ１７ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍ Ｕｎｉｖ，２０１６，４７（１）：１０６－１１１ ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＴｈ１７ｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｉｎｖｉｔｒｏ  ＷＡＮＧＣｈｅｎ牞ＧＵＯＷｅｉ牞ＷＡＮＧＸｉｎ牞ＹＵＤｏｎｇｍｅｉ牞ＷＡＮＧＹｕｈｅｎｇ牞ＹＡＯＷｅｎｂｉｎｇ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ牞ａｓｅｒｉｅｓｏｆｒｅｌａｔｅｄｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｖｉａｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ牞ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕ ｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ牗ＥＬＩＳＡ牘ａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ牗ＱＰＣＲ牘ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｉｎｖｉｔｒｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ ｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＴｈ１７ｃｅｌｌｓＨｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ牗ＰＢＭＣｓ牘ｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｆｒｅｓｈｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄｕｓｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅＴｈ１７ｃｅ