牛乳过敏原_乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立.docx

牛乳过敏原β2乳球蛋白间接竞争 EL ISA 检测方法的建立布冠好郑 喆郑 海罗永康(中国农业大学 食品科学与营养工程学院 ,北京 100083)摘 要 检测牛乳中的主要过敏原β2乳球蛋白 ,利用β2乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔 ,制得兔抗牛β2乳球蛋白的多克隆抗体 ,以β2乳球蛋白包被抗原 、自制抗体为一抗 、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 Ig G 为二抗 、四甲基联苯胺( TMB) 为底物 ,建立了牛乳中β2乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法 ( EL ISA) 。确定了包被抗原质量浓度为 01 5 μg/ mL ,一抗最佳稀释度为 1 ∶6 400 ,酶标二抗稀释度为 1 ∶10 000 。结果达到批内误差 31 87 % ,批间误差 61 51 % ; 检测的线性范围为 01 05～11 00 μg/ mL ,标准曲线回归方程 y = - 11 930 2 x - 01 124 1 ,相关系数为01 994 5 ,说明所建立的方法灵敏度高 ,具有良好的准确性和重复性 。关键词 牛乳 ; β2乳球蛋白 ; 过敏原 ; 多克隆抗体 ; 间接竞争 EL ISA ; 检测中图分类号TS 252 . 7文章编号 100724333 (2008) 0620071206文献标志码 AA met ho d fo r det e ctingβ2la cto glo bulin in co w milk alle rge ns byindire ct co mp etitive e nzyme2linke d immuno so rbe nt a s sa yBU Gua n2hao , ZHEN G Zhe , ZHEN G Hai , LUO Yo ng2ka ng( Colle ge of Food S cie nc e a nd Nutritional Engine e ring , China Agric ult ural Unive rsit y , Beijing 100083 , China )Abstract β2l a c t o globulin is t he main alle rg e n in c ow milk a nd t o d e t e c t it in the milk , a n indire c t c omp e titive e nzyme2linke d immunos orb e nt a s s a y ( ELISA) w a s d e velop e d . A p olyclonal a nti bo dy w a s p rep a re d by immunizing Ne w Ze ala nd ra b bit s withβ2la c t o globulin. Re s ult s s how e d t ha t the op timal c onc e ntra tions of the c oa ting a nti ge n , p olyclonal a nti bo dy a g ains t β2l a c t o globulin a nd hors e ra dis h p e roxi d a s e c onjug a t e d goa t a nti2ra b bit Ig G w e re 01 5 μg/ mL , 1 ∶6 400 a nd1 ∶10 000 re s p e c tively ; The c oefficie nt s of va ria tion of intra2a nd int e r2a s s a ys w e re 31 87 % a nd 61 51 % . The s t a nda rd c urve of indire c t c omp e titive ELISA w a s als o obt aine d with the re gre s sion e qua tion a s y = - 11 930 2 x - 01 124 1 ( r2 =01 994 5) a nd the c urve w a s line a r within the ra ng e of 01 05 - 11 00 μg/ mL . Thus , t his me tho d ha s good s e nsitivit y f ort he d e t e c tion of β2la c t oglo bulin in c ow milk .Ke y wo rds c ow mik ; β2la c t og