DMD的基因诊断-进修生3.ppt

GJB2基因编码产物为间隙连接蛋白分子26（connexin 26，CX26） CX26在细胞与细胞间形成间隙连接，在感觉毛细胞受到声音的刺激后钾离子回流到内淋巴液的过程中起着重要的作用。 检测方法：PCR+测序 目前已报道的致病突变有191种。 其中235delc为最常见的突变形式，占75% SLC26A4基因 定位于7q31，gDNA长约57kb,由21个外显子组成，编码序列长2343bp。 SLC26A4基因编码pendrin蛋白，为膜蛋白分子，介导阴离子转运。 pendrin蛋白在耳内主要表达于内淋巴导水管及内淋巴囊，球囊和椭圆囊，耳蜗内的外侧沟，参与维持内耳的离子浓度。 检测方法：对21个外显子直接测序 药物性耳聋 已知的耳毒性药物有近百种 氨基甙类抗生素（链霉素、卡那霉素、新霉素、庆大霉素等），最为常见。 大环内酯类抗生素（红霉素等） 抗癌药（长春新碱、2－硝基咪唑、顺氯氨铂） 水杨酸类解热镇痛药（阿司匹林等） 抗疟药（奎宁、氯奎等） 袢利尿剂（速尿、利尿酸） 抗肝素化制剂（保兰勃林） 铊化物制剂（反应停） 线粒体12SrRNA基因 在线粒体基因突变导致耳聋的患者中，绝大部分是由于A1555G突变引起。 检测方法：PCR+测序 引物名称 引物序列 12SrRNA-F CCTCAACAGTTAAATCAAC 12SrRNA-R CTCTGGTTCGTCCAAGTG mtDNA A1555G 突变发生在12SrRNA 与氨基糖甙类抗生素（AmAn）结合区的编码区。 该突变可增强AmAn与12SrRNA的结合，干扰线粒体蛋白质和ATP的合成，最终导致耳聋。 有文献报道大部分的mtDNA A1555G 突变患者，在没有使用AmAn的情况下也会致聋, 而AmAn只是加快了这个过程。 脆性X综合征 脆性X综合征（fragile X syndrome），是最常见的X连锁的单基因性智力低下综合征。 1969年美国Lubs在X连锁智力低下的家系中，发现带有一条长臂末端具随体样结构的X染色体，1977年澳大利亚Sutherland将这种随体样结构定位于Xq27，并命名为脆性部位（fragile site），脆性X综合征因此得名。 　 发病率仅次于21-三体综合征 群体发病率： 男性全突变率 1：3600~4000， 女性全突变率 1：4000~6000 1bp 1Kb 2Mb 6Mb 100Mb 亚带、带、区、臂 整条、整组染色体 基因疾病 ※基因组疾病 染色体疾病 基因病诊断高技术平台 基因组疾病诊断高技术平台 染色体病诊断高技术平台 以PCR加DNA测序为基础，共由 10余项技术组成。 以SNP array加Bac克隆原 位杂交（FISH）技术为 基础，共由10余项技术组成。 以染色体G显带技术加染色体 原位杂交技术（FISH）为基础， 共由20余项技术组成。 …… 脊髓性肌肉萎缩症 脊髓性肌肉萎缩症 SMA 由于脊髓前角细胞运动神经元变性 导致近端肌肉萎缩和无力 发病率1/10000 遗传方式：常染色体隐性遗传 临床特征 婴儿期学龄前及青春期发病 表现为四肢的近端肌肉对称性 进行性无力及萎缩 肌张力降低，腱反射减退或消失 呼吸衰竭 肌电图:神经元性损害 肌酶学检测:多为正常 临床类型 SMN基因 定位：5q11.2-11.3。 结构：长20kb，8个外显子， 突变：98.7%为外显子7和/或8的缺失 2.3%为点突变与缺失相结合的 杂合子 PCR-酶切法检测SMN基因 原理: SMN2的7、8号外显子分别存在一个DraI 和DdeI酶切位点，而SMN1 没有 其PCR产物进行酶切后可以检测SMN1是否有7、8号外显子的缺失 PCR反应体系 7号外显子PCR反应条件 8号外显子PCR反应条件 PCR产物酶切体系及条件 测 序 对SMN基因EXON7、8进行直接测序 可确证PCR-酶切法的检测结果 可避免PCR-酶切法酶切不全造成的假阴性结果 MLPA 非综合征型耳聋 耳聋简介 听力丧失是最常见的感觉障碍。 发病率：1/500 新生儿 非综合征型耳聋(nonsyndromic hearing loss, NSHL)：指不伴有耳外组织异常或病变的耳聋。 遗传方式：常隐、常显、X连锁、线粒体遗传 耳聋相关基因 已经定位120多个 NSHL基因位点 。 克隆确认了41个核基因 。 线粒体基因2个。 最常见的致病基因： GJB2 、SLC26A4 、mtDNA A1555G 1998年夏家辉院士等成