胀果甘草复合体的等位酶分析研究.pdf

全国第二届中国甘草学术研讨会暨第二届植物资源开发、利用与保护学术研讨会会议论文摘要集 胀果甘草复合体的等位酶分析木 马淼李学禹 (石河子大学甘草研究所。石河子832003) of inflataComplex AllozymeAnalysisGlycyrrhiza Ma Miao，LiXue—yu (InstituteofLicoriceinshihezi University,Shihezi。Xinjiang，832003) 摘要：本文以居群思想为基础，运用等位基因酶(Allozym)的分析手段，分析测定了胀果甘草复合体 传结构及遗传多样性。 ’ 关键词：胀果甘草黄甘草阿拉尔甘草等位酶分析居群遗传多样性。 自1959年同工酶概念的问世以来，同工酶电泳技术就逾来逾多地被广大生物学家所重视，由 于同工酶技术提供了一大批可靠的遗传标记，因此为生物的遗传变异和进化的研究提供了一种重要 Crawford，1990；Murphy等，1990)。 同工酶是指具有相同或相似的底物，催化相同的化学反应的同一种酶的多种分子形式，早期的 “同工酶”概念是广义的，它包括了同一位点的不同等位基因以及不同的基因位点所编码的同一种 酶的不同分子形式。但近期的文献使用的同工酶的定义，则是狭义的，它仅指由不同基因位点所编 码的．同一种酶的不同形式。(王中仁，1996)而将同一基因位点的不同等位基因所编码的同一种酶 简称为等位酶(allozyme)。将等位酶从广义的同工酶概念中区分了出来，从此对酶基因的表型，即 酶谱的遗传学分析具有了更深的意义。除去了人为及生理因素的干扰，尤其是等位酶以孟德尔方式 遗传，并以共显性方式表达，克服了利用形态学标记的传统方法的显隐性效应所带来的局限与不足， 利用等位酶分析的方法可以从遗传学上把类群间的亲缘关系进行数量化，增加了系统学和进化学研 究的可实验性和可重复性，因而现已成为系统与进化研究中的一项重要的手段。 生物是划分为不同层次的，目前已知的重要层次有基因，细胞、器官、个体、居群和群落等6 个，物种是生命运动的重要基本单位，但物种并不是直接由个体组成的，而是首先由个体形成一定 的居群，再由居群有规律地进行组合而成其为物种。居群是物种的存在形式，是物种进化的基本单 元，(陈家宽，1994)因此要研究物种的形成与进化，就必须要从居群的层次入手。 利用等位酶分析技术，从居群内，居群闻。及种间来探讨本复合体各屠属的遗传变异的水平与 居群间的遗传分化的程度是本研究的目的。 一、材料和方法 以居群为单位野外采样，在天生居群里采集本复合体10个居群及2个相关居群(Av及BHll『)的 成熟种子，在25℃的光照恒温培养箱中培养5天，每个居群选取发育良好的个体8—14株，取子 叶 作为试验材料，加Tris一马来酸复杂提取缓冲液在—_20C的冰块上充分研磨提取，得到样品 液，加沁子(wicks)随即加样电泳或将浸好样的沁子置于一80℃的低温冰柜中保存备用。Trls一马 作保护剂。 采用水平切片，淀粉凝胶电泳，凝胶模盘的规格为185minX 每板胶可加32_4Q个样品沁予。 在预试验的基础上选取分离及显带效果较好的#IB及#6电泳、凝胶缓冲液，配方如下：#IB柠 檬酸三钠／o．01mol／L组氨酸缓冲液(据Gottlieb，19Blb．略做改动) 电泳缓冲液： O．4t001／L柠檬酸三钠 117．649柠檬酸三钠+水至1000ml用lmol／LHCL或柠檬酸调酸度至pH7．0 牢国家自然科学基金资助项目 全国第二届中国甘荜学术研讨会暨第二届植物资源开发、利用与保护学术研讨会会议论文摘要集 6硼酸钠／Tris一柠檬酸，pH8．6缓冲液(据Mitton等，1977) 电泳缓冲液： 0．imOl／LNaoH，0．3mOl／L硼酸 4．OOg氢氧化钠+18．559硼酸+水至1000ml调酸度至