第三章 高效液相色谱法2.ppt

第三章 高效液相色谱法; 高效液相色谱法： 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实 验技术建立的一种液相色谱分析法。 高压：150-350*105 Pa 高效：大于30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测）;;一、HPLC与GC对比;2．流动相区别 GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用 力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用 力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起 正向作用。 3．操作条件区别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） ;二、HPLC的特点和实际应用;§3-2 基本理论和条件选择;三 速率方程;2）涡流扩散项及其影响;3）传质阻力项及其影响 ;流动相流速对板高的影响;1． ;1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相dp≤10μm）,首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇，约1ml/min 3. 柱温的选择： 选室温250C左右;一、液固吸附色谱法（LSC） (liquid-solid adsorption chromatography) 二、液液分配色谱法（LLC） (liquid-liquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography 三、离子色谱法（IC） （ion-exchange chromatography and ion pair chromatography) 四、空间排阻色谱法（SEC） （ steric exclusion chromatography ;1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异 ;2 固定相;固定相：固定相粒径（10μm） ;3 流动相(洗脱剂);硅胶固定相分离苯，甲苯，乙苯，丙苯，丁苯;4 竞争吸附平衡;5 应用;1．分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异;2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性→NLLC 固定液——非极性→RLLC 3．正相色谱——固定液极性 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离非极性组分 ;;（一）常规化学键合相;;4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先 出柱,极性大的组分后出柱 ;（三）反相键合相固定相;4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5．出柱顺序： 极性大的组分先出柱,极性小的组分后出柱 ;三 离子交换色谱法;2 固定相;3 流动相;4 应用;四 空间排阻(凝胶)色谱法;2 固定相;§3-4 高效液相色谱仪;液相色谱;高压泵;一 高压输液系统;2 梯度洗脱装置;等度洗脱与梯度洗脱;;3 贮液瓶及流动相;二 进样系统;三 色谱柱;四 检测系统;;紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。;3 荧光检测器;4 示差折光检测器;5 化学发光检测器;6 电化学检测器;§3-5 高效液相色谱分离类型的选择;毛细管固相微萃取－液相色谱法测定水中的多环芳烃 仪器设备 高效液相色谱HP21050 (美国惠普公司) ,包括Rheodyne 7125 进样阀(20μL) , 四元溶剂泵,紫外检测器。色谱柱为Hewlett Packard ODS hypersil (5μm ,200 mm ×4. 6 mm) 。 色谱条件: 流动相为乙腈∶水= 90∶10 (V∶V) ,流速0. 6 mLPmin。根据各待测物质的保留时间将检测器波长按时间程序设置为各物质相应的最大吸收波长(蒽:λ= 240 nm;荧蒽:λ= 236 nm;1 ,22苯并蒽:λ=287 nm) 。 进样器(25μL , 500μL) 购于美国Hamilton 公司,其针管部分可拆卸更换。进样器泵(美国Harvard Apparatus 公司) 用于控制进样器排出水样的速度。 ;;