三聚氰胺测定不确定度评估报告.doc

HPLC法测定奶粉中三聚氰胺含量的不确定度评估 目标 为了三聚氰胺测量方法的优化和更准确地评价三聚氰胺的结果，采用B类评定方式确定该方法的相对不确定度。 测定程序 方法依据：GB/T 2388-2008《原料乳与乳制品中三聚氰安检测方法》 样品提取 称取3g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待测净化液。 净化 将待净化液转移至固相萃取柱（BESEP HR-XC）中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。 液相色谱条件 C18柱，250mm×4.6mm×5um 离子对试剂缓冲溶液-乙腈（88+12，体积比）。 流速：1.0mL/min 柱温：40℃ 波长：240nm 进样量：20uL 标准曲线的绘制 标准储备液的配制 准确称取0.2330g三聚氰胺标准品于50mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为464ug/mL的三聚氰胺标准储备液。 标准工作液 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到浓度分别为0.8、2、20、40、80ug/mL的标准工作曲线，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度做标准曲线，得到标准曲线回归方程。具体配制过程见下表： 表1 标准工作液配制过程 标准工作液浓度（ug/mL） 稀释过程 吸取液浓度（ug/mL） 吸取量（mL） 定容体积（mL） 80 464 1.725 10 40 80 5 10 20 80 2.5 10 2 80 0.25 10 0.8 80 0.1 10 建立数学模型 试样中三聚氰胺结果计算公式如下： 式中： X——试样中三聚氰胺的含量，单位是毫克每千克（mg/kg）； C——样液在标准曲线所读的浓度值； V——样液最终定容体积，单位为mL； m——试样的质量，单位为克（g）； f ——稀释倍数。 分析确定不确定度的来源 从测量过程和数学模型分析，影响三聚氰胺含量的测量不确定度主要来源于：体积的相对不确定度、质量的相对不确定度、标准溶液校准的相对不确定度和前处理影响因子的相对不确定度。体积的相对不确定度是由人员、温度和量具本身影响的；质量的相对不确定度是由称量过程中人员和天平本身影响而导致的；标准溶液校准的相对不确定度是由工作曲线的非线性、标准溶液的不确定度影响；前处理影响因子的相对不确定度是由仪器不稳定性、前处理和其他因素影响。详细如图一鱼骨图所示。 图一 鱼骨图 （曲线校准） （前处理影响因子） 工作曲线拟合 定容过程 配制容器校准 标准物质称量 稀释过程 标准溶液的不确定度 仪器测试的影响 样品中含量 (体积) （样品质量） 计算不确定度分量 由标准曲线求得样液中三聚氰胺的浓度引入的标准不确定度u（Cx） 配制标准工作溶液引入的不确定度 标准物质引入的标准不确定度u（p） 根据标准物质证书给出的信息，三聚氰胺标准物质的相对不确定度为0.5%，参考文献[3]中由于标准证书给出无法定量的限值，因此按矩形分布处理： =0.00289 标准物质称量引起的标准不确定度 准确称取0.2330g标准品，根据电子天平检定证书，0≤m≤5g，天平最大允差为：0.0005g，按均匀分布考虑，=2.89g，天平重复性误差：±0.0001g，，称量引入的标准不确定度=0.0003， 相对不确定度=0.00129。 配制工作液配制过程中量器校准引入的不确定度 标准溶液配制过程中使用了一系列量器，容量瓶按均匀分布计算，移液器不确定度按照正态分布计算。如表2所示： 表2 玻璃量器校准引入的标准不确定度 玻璃量器 最大允差 标准不确定度 相对标准不确定度 50mL容量瓶 0