分子生物学技术在香菇研究中的应用.docx

24海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药菌学术研讨会分子生物学技术在香菇研究中的应用姚强1刘岩2宫志远p高兴喜3韩建东1任鹏飞1万鲁长1 任海霞11山东省农业科学院农业资源与环境研究所山东济南2501002青岛农业大学生命科学学院山东青东大学茵物科学与技术研究院山东烟台264025摘要：本文对近年来香菇分子生物学技术取得的成果进行了综述，着重阐述了香菇的遗传转化，基因克隆，DNA分子标 记和基因组学的研究进展。关键词：香菇，分子生物学，进展Application of Molecular Biological Techniques in Study of Lentinus edodesYAO Qian91LIU Yah2GONG Zhi．Yuanl。GAO Xing．Xi3HAN Jian．Don91REN Peng．FeilWAN Lu．Zhan91KEN Hai．Xialtlnstitute ofAgriculturalResources andEnvironment，ShandongAcdemy ofAgricultralScieneces,SkandongJinan 250100 2School ofLife Sciences,Qingdao Agricultural University,Shandong Qingdao 266109Jlestitute ofMycological Science and Techonot弘Ludong University,Shandong Yantai 264025Abstract：This paper reviewed the advances in molecular biological study of L．edodes，which mainly focused on the genetictransformation,geae cloning，DNA markers and gcnomic study in this edible and medicinal fungus．Key words：Lentinus edodes，molecular biology,advances香菇(Lentinus edodes)又名香菌、花菇、香簟，属于真菌门，担子菌纲，伞菌目，口蘑科，香菇属 (宋士良1995)，是一种食药同源的食物，具有很高的营养、药用和保健价值，其中的香菇多糖具有免疫 调节，抗肿瘤，抗感染等生物活性而受到广泛的关注(丛阳和黄敏2010)，是研究木质纤维素降解的重要 模型(关海山和区骏恒2010)，具有广阔的国内国际市场，潜力巨大。随着分子生物学技术在食用菌研究上的活跃应用，对香菇的研究开始集中在其遗传信息和调控上，为改良栽培菌株提供了有力的手段。本文就香菇的遗传转化，基因克隆，分子标记和基因组学的研究情况进行了阐述。基金项目：国家食用菌产业技术体系建设项目(编号：CARS-24)；山东省农业良种工程项目(编号：2010洲)．．(=o竹瞄珥材曲唱越Imof．B删：印叫蛳”皿D《鱼姐a錾．cn海峡两岸第十届菌物学暨第三届食药菌学术研讨会 251遗传转化1．1 PEG法PEG法主要是依靠PEG使细胞膜之间或DNA与膜之间形成分子桥，促进细胞的接触和融合或者干扰 细胞间的识别而有利于外源DNA的识别。1991年世界上第一次报道了食用菌中使用PEG法成功遗传转化的例子，是ChallcnⅧ等利用PEG法把外源DNA导入双孢蘑菇受体菌的原生质体内获得转化子(Challenet a1．1991)。之后孙丽等(孙丽和林忠平2001)利用PEG法实现了表达载体p301．bGl对香菇原生质体 的转化，得到了抗除草剂和有GUS活性的转化菌株。闫培生等(闰培生等2002)将携有潮霉素抗药性基 因的质粒载体导入香菇原生质体内，获得了抗性转化子，但转化率较低，每微克DNA仅有0．5个转化子。PEG法虽然操作简单，重复性好，无需昂贵的设备，但是原生质体的浓度、PEG以及质粒DNA的用量对转化 效果都有一定影响，转化效率低，一般仅为10一．10击。1．2电激法电激法是通过高压电脉冲作用，在原生质体膜做可以恢复的击穿引导外源DNA的摄入，经过发展改良 后可直接在带壁的细胞组织上打孔。Royer JC等第一次成功利用电激法把二氢乳清酸脱氢酶基因URA l转入同源的杨树菇营养缺陷型突变型菌株ural菌株中(Royer and Horgen 1991)。在1997年贾建航等(贾 建航等1997)利用电激法将香菇的DNA导入平菇，并且获得可以出菇的转化子。最近Kuo CY(Kuo and Huang 2008)以香菇孢子和菌丝体为实验材料使GUS基因成功的在