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初论免疫组化标准化
?初论免疫组织化学标准化rK{YL? ? ? ? ? ? ? 王丽 张秋金 林齐心 王小亚 福州 350002OIlC ?中华病理技术论坛--最权威的病理论坛! -- 中华病理学者交流的园地 t2\单克隆抗体的问世与免疫组织化学检测系统持续快速的发展,使免疫组织化学技术在现代病理诊断中的应用日益广泛,且倍受病理界的关注与青睐。最初由70年代初期仅在实验室中科研的尝试,其间历经二三十年时间,该项技术今日已发展到成为常规病理诊断中必不可少的可靠的辅助诊断手段。由于随着免疫组织化学试剂的大量涌现,1998年美国FDA颁发了《免疫组化试剂重新分类标准》,将其免疫组化试剂抗体统分为三大类,Ⅰ类抗体,在病理鉴别诊断中用于判定组织起源指标;Ⅱ类抗体,为雌、孕激素受体,用于乳腺癌患者中雌、孕激素受体的检测,雌、孕激素受体激素水平的测定以指导患者的内分泌治疗;Ⅲ类抗体,为现今仍处于科研文献论证阶段的新试剂[1]。试剂的规范化要求越来越受到重视。Po分子医学的发展,治疗性的人源性单克隆抗体引入了临床,免疫组织化学技术已经作为独立的一项检测指标用于指导临床个性化治疗[2]。目前已有十几种人源性单克隆抗体,通过了临床期实验。代表性的C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达,该项免疫组织化学检测方法已经通过美国FDA认证,免疫组织化学检测结果直接指导临床治疗。ER/PR检测是目前病理科常规开展的免疫组化检查项目,每个实验室都日常进行ER/PR检测,但值得注意的是每个实验室间得出的实验结果往往大相径庭[3,4,5],ER/PR检测的实验结果直接指导乳腺癌患者的预后与治疗,随着检测方法直接渗透到病人预后与治疗方案中,所以方法学标准化重要性的问题日趋突出与严峻。就免疫组织化学标准化的概念新近由美国国家临床实验标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS)于1999年正式出台了纲要性文件[6,7,8]。随着国内免疫组织化学技术应用日益广泛,免疫组化实验结果的可靠性、可重现性以及实验室之间的学术交流也愈来愈受到高度重视。实验室间的交流需要采用通用的术语和实验规则,实验室的仪器设备、技术操作规范、实验技术人员的资格等外部环境条件都有必要得到重视[9],这些影响因素也常常是令实验室感到棘手的问题,同时免疫组织化学实验技术在实际操作中还仍然存在着许多有待商榷的问题[2]。尽管在免疫组织化学理论上十分的简单,但日前让每个实验室能够持续稳定地完成可靠的实验染色结果还仍然是颇为困难的事情,因为诸多的因素最终可以影响免疫组化的结果,若想得到最佳可靠的实验结果,当务之急是将免疫组织化学技术中的全部实验程序变得易于操作与掌握,达成概念上的标准化。Y
一、免疫组化诊断成功的关键要素wq1.病理科主任Mt要确保实验室中免疫组化诊断成功的完成,首要关键因素是病理科主任必须具有相当过硬的免疫组化诊断知识与丰富的免疫组化技术经验,尤其在免疫组化结果与常规诊断出现矛盾时更显突出[3]。病理科主任应十分清楚免疫组织化学技术是一项实验性很强的技术,是一门需要进行继续再教育的课程,并有责任对病理医生进行不断地培训,提高他们的免疫组化诊断水平,特别是在技术人员将一张染色比较差的切片呈现在面前,以及听到病理医生抱怨病理技术人员总是做不好免疫组化染色时,更应客观地对待。病理医生往往是静止地看待免疫组化染色结果,往往这种认识是不妥当的。在实际工作中,病理科主任还需要不断地学习有关免疫组化的文献资料,加深了解多种抗体在组织中预期表达情况,避免错误的判断与解释。}*z@j2.病理技术工作者M病理技术工作者也是免疫组织化学中成功的关键因素,病理技术人员应该在制备超薄组织切片和免疫组化实验操作技术训练中过关,得到认可,要十分清楚地懂得免疫组织化学中的实验原理,并且在日常实际工作中需要及时地与病理主任进行信息交流。q3.可靠的试剂与实验方法j3{m2$免疫组化实验检测方法多种多样,抗体的种类繁多,商品化的试剂也越来越简便、高效与便捷。目前绝大多数实验室使用的检测系统均为辣根过氧化物酶(HRP)为基础的检测系统,DAB显色。每个实验室必须确保购买有产品质量保证的著名厂商的试剂,值得注意的是还必须在本实验室内进行最佳实验条件的摸索工作。0=v4.实验质控对照的设立A!1x?免疫组织化学实验中实验对照的概念在许多实验室内都是极其容易被忽视的问题,但实验对照绝不是一个虚设的多余的程序,在每次的实验中它作为敏感性与特异性的对照作用相当的重要,且多组织芯片在对照实验中将发挥越来越大的作用。WM+Z?中华病理技术论坛--最权威的病理论坛! -- 中华病理学者交流的园地 `s二、免疫组化染色技术Vw在免疫组织化学实验
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