小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征.docx

第42卷第5期浙江大学学报(医学版)Vol42No52013年JOURNAL0FZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)2013http：∥www．joumals．zju．edu．cn／medDOI：10．3785／j．issn．1008_9292．2013．05．009小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征李彤1，郭美媛1，马葵芬1’2，杜悦1，何良艳1，朱丹雁1，楼宜嘉1(1．浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所，浙江杭州310058；2．浙江大学医学院附属第一医院药剂科，浙江杭州310003)[摘要]目的：观察小鼠胚胎干细胞定向分化肝组织过程中，肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶尿苷-5’．二磷酸葡醛酰转移酶(UGT)1a1、1a6和微粒体谷胱甘肽S．转移酶1(mGSTl)的表达及其催化活性。方法：利用拟胚体固有的三胚层结构，直接由中胚层心肌细胞产生成纤维细胞生长因子，自发诱导内胚层细胞发育，并由同步分化的内皮细胞支持肝细胞发育形成肝样组织。在不同分化阶段，基于mRNA表达情况，以westemblot法检测uGTlal、uGTla6和mGsTl表达特征。至分化终点(第18天)以心肌细胞搏动区域附近表达肝特异性标记物白蛋白确定为肝细胞。超声法碎裂细胞，超速离心制备肝细胞微粒体，以HPLC检测uGTs代谢活性，以色谱法测定并计算mGSTl酶催化活性。结果：至分化终点，小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织表达uGTlal、uGTla6和mGSTl，并具有UGTlal、UGTla6和mGsTl的催化功能。其中分化第18天肝组织GSTl催化活性为7．65nmol·min-。·mg～。结论：小鼠胚胎干细胞分化的肝组织具UGTlal、UGTla6和mGSTl代谢功能，可望成为肝脏病理生理和药物Ⅱ相代谢研究的体外模型。[关键词]胚胎干细胞；肝／解剖学和组织学；谷胱甘肽转移酶；微粒体，肝；葡糖醛酸基转移酶[中图分类号]R742．1[文献标志码]A[文章编号]1008．9292(2013)05．0530．08CharacteristicsofmicrosomalphaseⅡmetabolicenzymesinmouseembrvoIlicstemceU．derivedlivertissueLITon91，GUOMeiyuanl，MAKuifenl”，DUYuel，HeLiangyanl，ZHUDanyanl，LOUYijial(1．，瑚￡i￡u把Q厂肌口胤口co锄，7如如。锄。蒯Bioc^em如口f骱口r僦ceu￡纽，coZf咿Q厂鼢。肌口ceMt记oZSciew∞，玩彬。增踟劫e您妙，肌哔^oM310058，现in口；2．死e见耶￡4历玩￡甜舶印i磁，劢咖。昭‰i睨巧妙Sc^00Z矿讹d记i聊，正『cz础on310003，C讫i凡口)[AbstIIact]Objective：‘110investigatethecharacteristicsofphaseⅡmetabolicenzymesinmouseembryonicstem(ES)ceU—derivedlivertissue．Methods：Maturehepatocyteswerediffbrentiatedfrom收稿日期：2012．11-21修回日期：2013m5-20基金项目：国家自然科学基金重大研究计划资助项目；浙江省自然科学基金重点项目(Lzl2H31001)；浙江省重点科技创新团队基金(2010R50047)．作者简介：李彤(1989一)，女，博士研究生，主要从事干细胞技术与非可控性炎症恶性转化调控网络研究；E．mailzju．edu．cn通讯作者：楼宜嘉(1953一)，女，博士，教授，博士生导师，主要从事干细胞与转化医学、心脑血管与肝脏药理、药物毒理学领域研究；E—mail：yijialou@zju．edu．cn．万方数据第5期李彤，等．小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征embryonicstemcellsinculturedmouseembryoidbodies(EB)atd18．Westemblotwasusedtodetecttheexpressionofuridine5’一diphosphateducronosyltmnsferase(U(汀1a1，u(汀1a6)andmicrosomalglutathioneJs．transferases1(mGSTl)duringthedifkrentiationcourse．ThederivedlivertissuewasincubatedwithUDPGAand7一HFC，thefo咖ationof7一HFCglucumnidewasdetectedb